酒及酒精性饮料作为一种常用的饮品，具有悠久的历史。适量饮酒，能促进血液循环，具有养生保健的功效。但长期过量摄取易诱发酒精性脂肪性肝炎、肝硬化，还可影响多种药物在体内的代谢。在中国饮食文化中，人们有时不得不被动摄取过量酒精。当血中乙醇浓度超过800mg/L即为酒精中毒，俗称醉酒，会对中枢神经系统产生先兴奋后抑制作用，重度中毒可使呼吸、心跳抑制，造成死亡。 葛花为豆科植物野葛或甘葛藤的花，中医单纯的解酒中药仅有几味，葛花为其中之一，其主要成分为异黄酮类化合物及三萜皂甙。葛根含有异黄酮类化合物以及少量的黄酮类物质，黄豆苷元、黄豆苷、葛根素是主要活性成分。在中国传统医学中，葛花和葛根用于解除酒后宿醉及饮酒前服用防醉，已有大量药效学实验和数据证实，但目前尚缺乏药动学数据的支持。 因此，本项目的研究目的是：从乙醇在大鼠体内的药动学过程、酶活性方面研究葛花及葛根提取物对乙醇在大鼠体内的代谢性相互作用，以及对肝脏、胃黏膜乙醇脱氢酶活性的影响，明确其作用及机制，为葛花及葛根提取物作为解酒药的进一步开发提供科学依据，对我国传统解酒中药的现代化开发利用具有重要意义。 基于以上所述，本研究分为四部分：第一部分，建立并验证检测大鼠全血中乙醇浓度的顶空气相色谱分析方法；第二部分，研究葛根及葛花提取物对大鼠口服乙醇药动学的影响；第三部分，研究葛根及葛花提取物对大鼠静脉注射乙醇药动学的影响；第四部分，研究大鼠经葛花及葛根提取物灌胃处理后其肝脏和胃黏膜乙醇脱氢酶酶活性的变化情况。 一、建立和验证检测大鼠全血中乙醇浓度的顶空气相色谱(HS—GC)分析方法 目的：建立灵敏、特异、可靠、线性范围广的测定全血样本中乙醇浓度的HS—GC方法。 方法：全血样本以蛋白沉淀法进行处理，内标为正丙醇，经高速离心后，取0.8ml上清液注入4ml气密瓶密封，在70℃水浴中平衡20min，采用2ml注射器进样抽取顶空瓶中气体0.5ml，迅速注入进样口，这一过程在15秒内完成。测定中的气相色谱仪为VariantCP—3800，色谱分析柱为CP—WAX52CB毛细管石英柱，规格为15m×0.32mm×0.32μm。FID检测器温度：230℃；进样口温度：200℃；分流比：1：10。程序升温分离：初温40℃恒温1min以10℃/min升温至65℃，恒温1min。载气流速：氮气1.2ml/min；空气300ml/min；尾吹气30ml/min；氢气30ml/min，隔垫吹扫2～5ml/min。 结果：乙醇的线性范围为10mg/L～5000mg/L，检测限为2.19mg/L；乙醇与内标正丙醇的保留时间分别约为2.27min和3.07min。全血样本中乙醇的线性相关程度良好(r2均大于0.99)。以质控样本计算该分析方法的准确度在93.78％～99.52％范围内；日内精密度在3.02％～9.15％范围内，日间精密度在4.02％～10.46％范围内；相对回收率均在95.02％～111.16％的范围内。检测过程共3.5min，检测周期为5min。 结论：该分析方法经验证结果满意，样品处理及检测过程简单、快速，可满足乙醇临床前药代动力学研究的检测要求。 二、葛花及葛根提取物对大鼠灌胃给予乙醇的药动学影响 目的：研究葛根及葛花提取物对大鼠口服乙醇药动学过程的影响。 方法：本研究预先采用葛花提取物400mg/kg和葛根提取物200mg/kg对大鼠进行灌胃预处理，对照组以等体积超纯水代替，之后立即灌胃给予乙醇3.5g/kg。于给药后的5、15、30、45min及1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0h从颈静脉插管中取血100μl，用顶空—气相色谱法测定乙醇在大鼠体内的血药浓度变化。 结果：与对照组相比较，葛花提取物(400mg/kg)与葛根提取物(200mg/kg)的混合物与乙醇3.5g/kg同服，使乙醇的Cmax下降了34.98％(P=0.754)，AUC0-12h下降了51.26％(P=0.251)。给药组的CL/F为对照组的3.19倍(P=0.028)，MRT下降了25.90％(P=0.047)。 结论：葛花及葛根提取物与乙醇同服能降低大鼠体内血醇浓度，加快乙醇在体内的清除率，能有效地起到解酒作用。 三、葛根及葛花提取物对大鼠静脉注射乙醇的药动学影响 目的：研究葛根及葛花提取物对大鼠静脉注射乙醇的药动学影响。 方法：本研究预先采用葛花提取物400mg/kg和葛根提取物200mg/kg对大鼠进行灌胃预处理，对照组以等体积超纯水代替，之后立即由颈静脉注射乙醇1.0g/kg。于给药后的1、3、5、10、20、30、45min及1.0、1.25、1.5、1.75、2.0、2.5、3.0h从颈静脉插管中取血100μl，用顶空—气相色谱法测定乙醇在大鼠体内的血药浓度。 结果：口服葛花提取物(400mg/kg)与葛根提取物(200mg/kg)的混合物对静注后乙醇在大鼠体内的药动学过程有以下影响：AUC0-3h有下降的趋势，给药组较对照组降低了10.21％，t1/2较对照组降低了14.29％，Cl降低了15.28％，但差别不具统计学意义。 结论：静脉注射乙醇1.0g/kg，给药组与对照组药动学参数未发现显著差异，但给药组的AUC0-3h有下降的趋势，较对照组降低了10.21％，其余参数也显示给予提取物后乙醇在体内的代谢有加快的趋势。 四、葛花及葛根提取物对大鼠肝脏和胃黏膜乙醇脱氢酶酶活性的影响 目的：考察单独服用乙醇和与葛花及葛根提取物同服后大鼠肝脏和胃黏膜乙醇脱氢酶酶活性的变化情况。 方法：本部分建立了大鼠乙醇脱氢酶的分离纯化方法和酶活性的检测方法。将SD大鼠平均分为空白对照组、乙醇组、给药组，每组5只。空白对照组仅灌胃给予超纯水；乙醇组仅给予乙醇3.5g/kg；给药组在给予葛花提取物(400mg/kg)与葛根提取物(200mg/kg)后，给予乙醇3.5g/kg。大鼠经灌胃处理1h后，断头处死，取肝及胃组织，制备肝、胃黏膜胞浆蛋白，测定乙醇脱氢酶活性。 结果： 酶活性单位为U/mgprotein。 P：三组组间差异。 a：与空白对照组相比P<0.01;b：与空白对照组相比P<0.05，c：与乙醇组相比比P<0.05。 结论：口服乙醇会损伤胃黏膜和肝细胞，导致肝及胃黏膜ADH活性降低，而在葛花及葛根提取物的干预下，乙醇对肝及胃黏膜ADH的损伤程度降低，从而保护了ADH酶活性，使乙醇在体内的代谢加快，降低血醇浓度，从而产生解酒作用。 本研究建立了大鼠全血样本中乙醇浓度的顶空气相色谱(HS—GC)分析方法，阐明了传统中药葛花及葛根会影响乙醇在SD大鼠体内的药动学过程和对乙醇脱氢酶酶活性的影响。研究发现葛花及葛根提取物可保护肝乙醇脱氢酶活性，使乙醇在大鼠体内的代谢加快，血醇浓度降低，能起到解酒作用。这些结果为葛花、葛根与乙醇的相互作用提供理论基础，为解酒药物的开发提供有力支持。