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目的：探讨应用小RNA干扰技术降低cPLA2α的表达对乳腺癌细胞运动迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：1.采用免疫组织化学的方法检测cPLA2a在乳腺癌组织中的表达情况,统计分析cPLA2a表达与临床病理参数之间的相关性。2.应用cPLA2a的特异性抑制剂,观察乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞cPLA2α的作用特征变化,MTT实验检测细胞增殖能力的变化,通过划痕、趋化运动实验观察细胞迁移和定向运动能力的变化。3.利用StealthTM RNAi技术,瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞而降低其cPLA2α表达,分别采用RT-PCR和Western blotting技术检测cPLA2a的mRNA和蛋白的表达水平变化。通过划痕、趋化运动实验观察细胞迁移和定向运动能力的变化。肌动蛋白聚合实验检测EGF刺激不同时间后cPLA2a降表达引发肌动蛋白聚合变化；采用磷酸化特异性抗体,通过Western blotting技术检测cPLA2a降表达后EGF刺激不同时间cofilin磷酸化水平变化。观察另两个乳腺癌细胞系MCF-7和T47D细胞瞬时转染后cPLA2α降表达的蛋白表达水平和趋化运动能力变化。4.应用Western blotting技术检测cPLA2α降表达后,MDA-MB-231细胞在EGF刺激不同时间后Akt(Ser473和Thr308)的磷酸化水平变化。5.应用小干扰RNA技术,质粒稳定转染MDA-MB-231细胞而获得cPLA2α降表达的克隆细胞。分别采用RT-PCR和Western blotting技术检测cPLA2α的mRNA和蛋白的表达水平变化。通过“伤口愈合”实验、趋化运动实验观察乳腺癌细胞的迁移和定向运动能力变化；体外侵袭实验观察乳腺癌细胞的侵袭能力变化；细胞粘附实验观察乳腺癌细胞的粘附能力变化；Western blotting技术检测整合素β1(integrinβ1)和粘着斑激酶(FAK)的磷酸化水平变化,寻求相应的分子机制。6.在cPLA2α降表达的MDA-MB-231克隆细胞中加入不同浓度的花生四烯酸,MTT实验观察细胞增殖能力的变化；划痕、趋化运动实验观察细胞迁移和定向运动能力恢复的情况；Western blotting技术检测FAK磷酸化水平拯救的情况。7.通过软琼脂和细胞生长曲线实验,观察cPLA2α降表达的MDA-MB-231克隆细胞的增殖能力变化。8.分别采用皮下接种和鼠尾静脉注射的方式将cPLA2α表达降低的乳腺癌细胞注入免疫缺陷的小鼠(SCID)体内,观察在不同的时间肿瘤细胞的自发转移和被动转移情况。从而分析cPLA2α表达变化对乳腺癌细胞转移能力的影响。结果：1.cPLA2α在乳腺癌组织中的表达率显著高于相应癌旁组织；cPLA2α的表达与乳腺癌患者肿瘤大小和TNM分期无关；与淋巴结转移相关；在淋巴结转移阳性(LN+)的浸润性导管癌患者中,原发灶比转移灶cPLA2a的表达阳性数少。生物学标志物的检测结果表明：cPLA2a的表达分别与ER、PR、PCNA和P53的表达相比差别无显著性,与C-erbB-2的表达相比差别有显著性。2.应用cPLA2α特异性抑制剂后,MDA-MB-231细胞比对照组细胞划痕、趋化运动能力降低。3.利用StealthTM RNAi技术,瞬时转染MDA-MB-231细胞,和对照组相比cPLA2a的mRNA和蛋白表达水平降低。划痕和趋化运动能力降低。cofilin磷酸化水平变化不明显。MCF-7和T47D细胞瞬时转染后cPLA2a的蛋白表达水平降低,细胞趋化运动能力也降低。4.与对照组相比,cPLA2α降表达后的MDA-MB-231细胞Akt(Ser473和Thr308)磷酸化表达水平没有明显的变化,说明cPLA2α降表达的细胞运动水平变化与Akt通路无关。5.质粒转染MDA-MB-231细胞而获得cPLA2α降表达的克隆,与对照组相比mRNA和蛋白表达水平明显降低；划痕、趋化运动、细胞粘附和体外侵袭能力也同时降低；与粘附功能相关的磷酸化整合素β1 (integrinβ1)和FAK磷酸化的表达水平与对照组相比也明显降低。6.花生四烯酸可恢复cPLA2α降表达的MDA-MB-231克隆细胞划痕和趋化运动能力以及FAK磷酸化表达水平。7. cPLA2a降表达的MDA-MB-231克隆细胞的增殖能力和对照组细胞相比降低。8.cPLA2α表达降低的乳腺癌MDA-MB-231细胞注入免疫缺陷(SCID)的小鼠体内,肿瘤细胞的自发转移和被动转移能力降低。结论：1.cPLA2a在乳腺癌组织中表达的变化与患者发生肿瘤转移有关。2.cPLA2a参与EGF诱导的乳腺癌细胞的运动和侵袭。3.cPLA2a是通过调控FAK的磷酸化水平调节乳腺癌细胞的趋化运动。4.花生四烯酸及其代谢产物与cPLA2a降表达乳腺癌细胞的运动能力变化有密切的联系。5.cPLA2a参与体内乳腺癌细胞的转移。