研究背景:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌）是最常见的原发性肝癌类型。是一种恶性、侵袭性的疾病,预后极差。一般伴有慢性基础疾病,主要原因是HBV感染、HCV病毒感染、滥用酒精和非酒精性脂肪肝。肝癌的5年生存率仅为18%,是凶险程度仅次于胰腺癌的第二大致命肿瘤。更糟的情况出现在亚洲国家（如中国）,据报告患者的5年生存率甚至低于12%。大量医疗保险支出没有达到令人满意的效果,这使肝癌成为社会的沉重医疗负担。发现参与影响肝癌发生发展过程以及影响预后的关键基因,对肝癌靶向治疗和预后判断具有重要意义。环状RNA在体内发挥着基因调控的重要作用,同时在肿瘤的诊断、治疗和预后判断等方面发挥关键功能。因此本研究中从探索环状RNA的表达量变化、肝癌细胞的生物学变化入手,探讨其对肝癌的增殖、迁移、侵袭、周期与凋亡的影响,为肝癌的临床诊疗提供实验基础。研究目的:通过对不同肝组织和正常组织及肝癌细胞系中hsacirc0000591表达量的验证,探究hsacirc0000591在肝癌组织及正常组织中,是否存在表达量的差异。以及环状RNA hsacirc0000591在肝细胞系中的表达,及沉默环状RNA hsacirc0000591后对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、周期与凋亡的影响。研究方法:1.环状RNA的筛选及验证基于课题组前期测序数据我们选择了环状RNA hsacirc0000591进行研究。通过Sanger测序、核质分离、PCR等实验对hsacirc0000591的结构特点、亚细胞定位及结构稳定性进行了研究。2.hsacirc0000591在肝癌中的鉴定及临床意义对hsacirc0000591分子进行了深入研究,通过qPCR技术检测了人类肝癌组织及其对应的正常癌旁组织,并且对肝癌细胞系中hsacirc0000591的相对表达情况进行分析。最后对hsacirc0000591表达水平与患者总生存率（OS,Overall Survival）统计分析,并判断患者肝癌组织中hsacirc0000591表达高低与临床病理指标之间是否存在联系。3.hsacirc0000591对肝癌细胞生物学功能的影响本文采用CCK-8实验、EDU实验、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室侵袭迁移实验、流式细胞技术等方法研究了经过慢病毒感染后的沉默hsacirc0000591基因在肝癌细胞系中的表达情况,并通过上述方法技术研究了沉默hsacirc0000591基因表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡等生物学功能的影响。研究结果:1.环状RNA的筛选及验证我们证实hsacirc0000591为环状RNA结构,具有良好的环状RNA稳定性,亚细胞定位结果确定了 hsacirc0000591主要存在于细胞质。2.hsacirc0000591在肝癌中的鉴定及临床意义我们经qPCR实验验证了在84例患者肝癌组织中hsacirc0000591表达量明显高于其相对应的癌旁组织,根据收集的临床资料分析表明hsacirc0000591高表达组与患者白蛋白、谷氨酰胺转移酶、D-Dimer、CEA、CA199及肿瘤直径有密切关系。RLog-rank检验结果表明,肝癌组织中hsacirc0000591的高表达水平与低表达水平之间存在着明显的差异,本研究提示肝癌患者癌组织中hsa circ 0000591的高表达水平与预后不良存在正相关,hsacirc0000591有作为评估肝癌预后的有效生物标志物的潜力。对肝癌预后危险因素进行单因素和多因素分析后发现hsacirc0000591高表达是肝癌患者术后死亡和复发的独立危险因素。3.hsacirc0000591对肝癌细胞生物学功能的影响实验结果表明经过沉默hsacirc0000591后能够显著抑制肝癌细胞系的体外增殖能力。通过划痕实验、Transwell侵袭、迁移实验结果表明,沉默hsacirc0000591后能够对肝癌细胞的迁移、迁移能力有明显的抑制,流式细胞仪检测结果表明,经沉默后hsacirc0000591使肝癌细胞在G1/G2增多,促进凋亡。研究结论:1.hsacirc0000591呈现为稳定环状结构,且hsacirc0000591主要在细胞质中表达。2.hsacirc0000591在肝癌组织中相较于正常癌旁组织中高表达,并且与病人白蛋白、谷氨酰胺转移酶、D-Dimer、CEA、CA199及肿瘤直径等临床指标有密切相关。hsacirc0000591有用于预测评估肝癌术后的总生存率的潜力。3.hsacirc0000591的表达情况与肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力之间存在正向相关的联系。