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甜瓜细菌性果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli)和火鹤细菌性叶枯病(Xanthomonascampestris pv.dieffenbachiae)是世界性分布的毁灭病害,给瓜类产业和火鹤产业带来了巨大的经济损失。本研究主要从病害的传播途径和检测技术方面进行了深入研究,以期为病害的综合防治提供一定的参考和依据。
⑴明确了带菌种子、花粉管通道、带菌土壤及迸溅的水滴是甜瓜细菌性果斑病的传播途径。采用浸种法、点滴接种法、拌土法及水滴迸溅法接种细菌性果斑病菌于健康的甜瓜种子、雌花柱头、土壤及幼苗上,对细菌性果斑病的传播方式进行了研究。结果表明,浸种及点滴接种雌花柱头获得的带菌种子均可传病;菌土中的幼苗在出苗后13d就有病症出现,且随着生长期的延长,病情逐渐加重,发病最重幼苗的病叶率和病指分别为69.13%和25.72;病原菌随迸溅的水滴传播时,离菌源越近的幼苗发病情况越为严重,病叶率和病指分别为63.34%和47.12。
⑵明确了带菌土壤及迸溅的水滴是火鹤细菌性叶枯病的传播途径。采用拌土法、水滴迸溅法接种细菌性叶枯病菌于健康的火鹤植株上,对细菌性叶枯病的传播方式进行了研究。结果表明,菌土中的火鹤植株在移栽后14d有发病症状出现,后随着移栽天数的增加,病情逐渐加重,发病最重幼苗的病叶率和病指分别为84.74%和72.31;病原菌随迸溅的水滴传播时,离菌源越近发病越为严重,病叶率和病指分别为75.00%和55.54。
⑶建立了选择性培养基和Nested-PCR方法检测甜瓜带菌种子。采用选择性培养基(ASCM)对甜瓜带菌种子上果斑菌进行分离及富集,引用特异性引物,对ASCM培养液进行Nested-PCR扩增。结果表明,选择性培养基(ASCM),可特异性对甜瓜带菌种子上的果斑病菌进行分离、培养和富集;引物对SEQ10/SEQ12、SEQ11/SEQ12和Nested-PCR引物只在细菌性果斑病菌中分别扩增出262bp、241bp和241bp的特异片段,在其他菌种中无特异性扩增片段。进行常规PCR扩增,检测细菌性果斑病菌的灵敏度为1.92×10-4mg/L和1.92×10-3mg/L,而Nested-PCR的灵敏度可达到1.92×10-6mg/L。Nested-PCR方法检测ASCM培养液的最低浓度为2×105cfu/ml。
⑷建立了Nested-PCR方法检测火鹤细菌性叶枯病的病株。引用特异性引物,对土传试验中火鹤发病植株的根、茎、叶进行Nested-PCR扩增。结果表明,引物对PXadU/PXadL、NXadU/NXadL和Nested-PCR引物只在细菌性叶枯病菌中分别扩增出1570bp、785bp和785bp的特异片段,在健康植株和其他菌种中均无特异性扩增片段。用两对引物进行常规PCR扩增,检测叶枯菌的灵敏度为1.23×10-5mg/L和1.23×10-3mg/L,而Nested-PCR的灵敏度可达到1.23×10-7mg/L。Nested-PCR方法对发病植株的检测灵敏度可达到病情指数高于16.6的样品。
⑸明确了甜瓜细菌性果斑病和火鹤细菌性叶枯病的传播途径;建立了选择性培养基及Nested-PCR方法检测甜瓜带菌种子上的果斑病菌;建立了Nested-PCR方法检测火鹤病株中的叶枯病菌。对甜瓜细菌性果斑病和火鹤细菌性叶枯病的防控具有重要的意义。