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第一部分 靶向载药纳米脂质体的制备和基本特性研究
目的 制备抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体，并检测靶向载药纳米脂质体的基本特性及连靶情况。
方法 采用旋转蒸发法制备纳米脂质体，并用细胞膜红色荧光探针(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)标记，采用碳二亚胺法将纳米脂质体与带有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的抗PECAM-1连接，采用Malvern粒度仪测定靶向载药纳米脂质体平均粒径和电位，采用光镜观察纳米脂质体基本形状，透射电镜观察纳米脂质体载药情况，并且检测纳米脂质体载药的包封率，将其放在 37℃持续加热板上观察脂质球相变释放药物过程，荧光显微镜下观察纳米脂质体与靶向抗体连接情况。
结果 制备靶向载药纳米脂质体的粒径为(302.00±26.31)nm，电位为(-4.22±1.20)mV，包封率为(84.15±2.35)%。光镜下观察呈圆形，大小均匀。在 37℃持续加热板上，光镜观察到纳米脂质球慢慢相变并破裂释放药物。荧光显微镜下观察到纳米脂质体与靶向抗体连接成功。
结论 成功制备抗PECAM-1靶向载伊马替尼的纳米脂质体，其粒径和电位使其能在体内有效运输药物到达靶器官，并发挥作用。
第二部分 抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体对小鼠机械通气诱导肺损伤模型的预防作用研究
目的 探究抗 PECAM-1 靶向载伊马替尼的纳米脂质体对机械通气诱导肺损伤(mechanicalventilator-induced lung injury, VILI)的小鼠模型的预防作用效果。
方法 将小鼠随机分为 4 组：正常组、VILI 组、IM+VILI 组、IM-lip+VILI组。通气前，VILI组尾静脉注射100μL PBS，IM＋VILI组腹腔注射伊马替尼(1.5mg/20g)，IM-lip＋VILI 组尾静脉注射 100μL靶向载药纳米脂质体(约1.57mg/100μL)。机械通气3h后，收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)，测定总蛋白和中性粒细胞计数，酶联免疫吸附法测定BALF中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量，测定肺组织湿重/干重(W/D)比值，肺组织石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色观察病理情况，取IM-lip＋VILI组小鼠肺组织做冰冻切片观察脂质体在肺内的靶向定位。将抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体和无靶载药纳米脂质体经尾静脉注射入小鼠体内，取心、肺、肝、肾做冰冻切片，于激光共聚焦显微镜下观察两组纳米脂质体在体内器官的分布。
结果 通过与无靶纳米脂质体对比，抗PECAM-1靶向纳米脂质体可有效集聚到肺部，并且在肺组织分布最多。与正常组相比，VILI 组的病理切片有典型的肺损伤特点，病理评分明显升高(P=0.000)，W/D比值增加(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显上升(P=0.000)；与VILI组相比，IM+VILI组肺组织损伤评分降低(P=0.000)，W/D比值下降(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量减少 (P=0.000)；与IM+VILI组相比，IM-lip+VILI 组肺组织损伤评分降低(P=0.000)，肺 W/D 比值下降(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显减少(P=0.000)。
结论 靶向载药纳米脂质体能有效到达肺组织，通过抑制炎症反应减轻机械通气诱导肺损伤(VILI)。
目的 制备抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体，并检测靶向载药纳米脂质体的基本特性及连靶情况。
方法 采用旋转蒸发法制备纳米脂质体，并用细胞膜红色荧光探针(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)标记，采用碳二亚胺法将纳米脂质体与带有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的抗PECAM-1连接，采用Malvern粒度仪测定靶向载药纳米脂质体平均粒径和电位，采用光镜观察纳米脂质体基本形状，透射电镜观察纳米脂质体载药情况，并且检测纳米脂质体载药的包封率，将其放在 37℃持续加热板上观察脂质球相变释放药物过程，荧光显微镜下观察纳米脂质体与靶向抗体连接情况。
结果 制备靶向载药纳米脂质体的粒径为(302.00±26.31)nm，电位为(-4.22±1.20)mV，包封率为(84.15±2.35)%。光镜下观察呈圆形，大小均匀。在 37℃持续加热板上，光镜观察到纳米脂质球慢慢相变并破裂释放药物。荧光显微镜下观察到纳米脂质体与靶向抗体连接成功。
结论 成功制备抗PECAM-1靶向载伊马替尼的纳米脂质体，其粒径和电位使其能在体内有效运输药物到达靶器官，并发挥作用。
第二部分 抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体对小鼠机械通气诱导肺损伤模型的预防作用研究
目的 探究抗 PECAM-1 靶向载伊马替尼的纳米脂质体对机械通气诱导肺损伤(mechanicalventilator-induced lung injury, VILI)的小鼠模型的预防作用效果。
方法 将小鼠随机分为 4 组：正常组、VILI 组、IM+VILI 组、IM-lip+VILI组。通气前，VILI组尾静脉注射100μL PBS，IM＋VILI组腹腔注射伊马替尼(1.5mg/20g)，IM-lip＋VILI 组尾静脉注射 100μL靶向载药纳米脂质体(约1.57mg/100μL)。机械通气3h后，收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)，测定总蛋白和中性粒细胞计数，酶联免疫吸附法测定BALF中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量，测定肺组织湿重/干重(W/D)比值，肺组织石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色观察病理情况，取IM-lip＋VILI组小鼠肺组织做冰冻切片观察脂质体在肺内的靶向定位。将抗PECAM-1靶向载药纳米脂质体和无靶载药纳米脂质体经尾静脉注射入小鼠体内，取心、肺、肝、肾做冰冻切片，于激光共聚焦显微镜下观察两组纳米脂质体在体内器官的分布。
结果 通过与无靶纳米脂质体对比，抗PECAM-1靶向纳米脂质体可有效集聚到肺部，并且在肺组织分布最多。与正常组相比，VILI 组的病理切片有典型的肺损伤特点，病理评分明显升高(P=0.000)，W/D比值增加(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显上升(P=0.000)；与VILI组相比，IM+VILI组肺组织损伤评分降低(P=0.000)，W/D比值下降(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量减少 (P=0.000)；与IM+VILI组相比，IM-lip+VILI 组肺组织损伤评分降低(P=0.000)，肺 W/D 比值下降(P=0.000)，BALF中总蛋白、中性粒细胞数量、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显减少(P=0.000)。
结论 靶向载药纳米脂质体能有效到达肺组织，通过抑制炎症反应减轻机械通气诱导肺损伤(VILI)。