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甲状腺癌(Thyroid Cancer,TC)是最常见的内分泌恶性肿瘤,占全世界所有癌症诊断的约2.1%,其中约77%的TC发生在女性。TC的发病率在世界范围内持续上升,主要是由于诊断手段以及策略不断的发展和准确。TC也是美国女性中第五大常见癌症,据统计2015年男性和女性新发病例超过6.2万例。所有TC中有百分之八十是甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC),以乳头状组织学结构命名。PTC通常可以治愈,5年生存率超过95%。然而,PTC有一定机率分化为更具侵袭转移性和致命性的TC。目前的治疗手段包括手术、甲状腺激素抑制TSH治疗和放射性碘(RAI)治疗。微小RNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的保守小型非编码RNA。它可以通过与靶基因的3’非翻译区(3’-UTR)结合负向调节靶基因表达。因此miRNA可以诱导m RNA降解或抑制m RNA翻译从而抑制某些促癌基因的表达,进而抑制癌症的发生。有研究表明,在多种癌症中miR-141-3p发挥着抑癌基因的作用。但是miR-141-3p在PTC中发挥的作用尚未有文献报道。转录调节因子Yin Yang1(YY1)是GLI-Kruppel锌指蛋白家族的成员,参与胚胎发生,细胞增殖,DNA复制和分化等过程。YY1可以激活或灭活基因表达,具体取决于其相互作用的蛋白和作为表观遗传调控网络的功能。有研究表明,在前列腺癌、卵巢癌和结肠癌中发现YY1高表达。有文献报道,YY1在甲状腺癌细胞中m RNA和蛋白水平升高,在甲状腺肿瘤组织中也观察到YY1 m RNA的显著增加。本研究发现猫尾草异黄酮(Alpinumisoflavone,AIF)可以有效抑制PTC细胞的增殖、侵袭并且促进细胞凋亡;通过生物信息学研究发现,miR-141-3p在PTC细胞中异常表达,且它是AIF的一个潜在靶点,并揭示AIF通过miR-141-3p调控PTC发生发展的分子机制。随后本研究发现,miR-141-3p与YY1的表达在PTC中呈负相关,并且YY1是miR-141-3p下游靶基因。研究结果表明,miR-141-3p通过下调YY1表达抑制PTC的发生发展。综上所述,本研究发现AIF通过miR-141-3p下调YY1抑制PTC的发生发展,为今后治疗以及预后评估的生物标志物提供理论依据。第一部分AIF通过上调miR-141-3p抑制PTC恶性生物学行为目的:研究AIF对PTC细胞TPC-1和BCPAP的恶性生物学行为的影响,并探究AIF在体内和体外通过miR-141-3p抑制肿瘤发生发展的分子机制。方法:取生长状态良好的TPC-1和BCPAP细胞接种到细胞培养板,培养一段时间后,分别用不同剂量的AIF(0、5和10μM)处理两种细胞。随后用CCK-8和Flow cytometry检测细胞增殖和凋亡情况;并用Western blotting实验检测凋亡相关因子的表达情况。用Transwell以及Western blotting实验检测了AIF对细胞迁移、侵袭和EMT的影响。通过miRNA微列阵分析PTC中异常表达的miRNA,并分析AIF与miR-141-3p的靶向关系。通过CCK-8、Flow cytometry、Transwell以及Western blotting实验检测,AIF是否通过miR-141-3p影响PTC细胞恶性生物学行为。最后通过异种移植实验分析,AIF在体内是否影响PTC的发生发展。结果:AIF可以抑制PTC细胞增殖、侵袭、迁移以及上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的发生,并且促进细胞凋亡。MiR-141-3p是AIF的一个潜在靶点,AIF在体外通过上调miR-141-3p抑制PTC细胞增殖、侵袭、迁移以及EMT的发生,促进细胞凋亡。体内实验表明AIF能够抑制PTC的发生发展。结论:AIF通过上调miR-141-3p抑制PTC恶性生物学行为。第二部分miR-141-3p通过YY1抑制PTC的发生发展目的:研究miR-141-3p对PTC细胞TPC-1和BCPAP的恶性生物学行为的影响,并探究miR-141-3p通过下调YY1抑制肿瘤发生发展的分子机制。方法:通过q RT-PCR实验检测miR-141-3p在PTC细胞和组织中的表达情况。随后用CCK-8、Transwell和Flow cytometry实验检测在过表达和敲降miR-141-3p的情况下,细胞增殖、侵袭和凋亡情况;用Western blotting实验检测在过表达和敲降miR-141-3p的情况下,EMT相关蛋白的表达情况。通过生物信息学手段分析miR-141-3p与YY1的靶向关系。最后通过异种移植实验分析miR-141-3p在体内是否影响PTC的发生发展。结果:在PTC细胞和组织中,miR-141-3p和YY1的表达呈负相关关系。过表达miR-141-3p可以抑制PTC细胞的增殖、侵袭以及EMT,并促进细胞凋亡;敲降miR-141-3p可以促进PTC细胞的增殖、侵袭以及EMT并抑制细胞凋亡。在体内,miR-141-3p也抑制PTC的发生发展。通过miRNA芯片技术研究发现,YY1是miR-141-3p的一个下游靶基因,并且miR-141-3p负向调控YY1。通过回复实验发现,过表达miR-141-3p可以下调YY1对PTC细胞抑制作用。结论:miR-141-3p在体内和体外均可以抑制PTC细胞增殖、侵袭、以及EMT的发生,并且促进细胞凋亡。MiR-141-3p负向调控YY1,并且miR-141-3p通过下调YY1抑制PTC细胞增殖、侵袭、以及EMT的发生,并且促进细胞凋亡。总体结论:AIF通过miR-141-3p下调YY1抑制甲状腺乳头状癌发生发展。