【摘 要】
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紫杉醇是一类具有抗癌作用的新药,采取各种途径增加紫杉醇产量是当今研究和规模开发的重点。与从红豆杉中提取、化学合成方法相比,微生物发酵法产紫杉醇的优势明显。本试验以
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紫杉醇是一类具有抗癌作用的新药,采取各种途径增加紫杉醇产量是当今研究和规模开发的重点。与从红豆杉中提取、化学合成方法相比,微生物发酵法产紫杉醇的优势明显。本试验以从东北红豆杉分离的紫杉醇产生菌黑曲霉A.niger为研究对象,探讨了紫杉醇合成相关酶的诱导子、前体物(即紫杉醇合成途径相关酶底物)和代谢旁路酶抑制剂对A.niger合成紫杉醇含量的调控作用;采用RT-PCR技术从内生菌黑曲霉A.niger中获得了牻牛儿牻牛儿焦磷酸合成酶(GGPPS)基因片段,为进一步研究微生物发酵产紫杉醇生物合成代谢调控机制和代谢途径提供了理论基础。本试验的主要研究结果如下:1、向S-7发酵培养基添加适当浓度三类代谢调控因子即,分别添加诱导子:100.0mg/L茉莉酸甲酯,20mg/L水杨酸,1.5mg/L硝酸银,100mg/L壳寡糖;同时加入前体物质:10.0mg/L苯丙氨酸,20.0mg/L丝氨酸,0.6mg/L乙酸钠和15mg/L苯甲酸钠;分别添加代谢旁路抑制剂:2mg/L赤霉素,15mg/L肉桂酸时,都能提高黑曲霉A.niger发酵产紫杉醇的产量;2、从内生真菌A.niger中获得了牻牛儿牻牛儿焦磷酸合成酶(GGPPS)酶基因片段克隆,片段大小375bp,编码109个氨基酸与GenBank中收录的东北红豆杉GGPPS酶基因序列进行了比较,同源性达到98%;3、证实了牻牛儿牻牛儿焦磷酸合成酶(GGPPS)基因存在于紫杉醇产生菌-黑曲霉A.niger中,预示GGPP酶也存在于通过微生物发酵法生产紫杉醇的生物合成途径中。
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