【摘 要】
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利用卵母细胞体外成熟(IVM)技术,可大幅度提高卵巢卵母细胞的利用效率、充分挖掘优良母畜的繁殖潜力,加速家畜良种扩繁。本研究以Vetoquinol FSH(V-FSH)和Puregon FSH(P-FSH)两种不同来源的促性腺激素为基础设计6种培养体系(V-FSH+LH+E2+FBS、V-FSH+FBS、VFSH+LH+E2+BSA、P-FSH+LH+E2+FBS、P-FSH+FBS、P-FSH+
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利用卵母细胞体外成熟(IVM)技术,可大幅度提高卵巢卵母细胞的利用效率、充分挖掘优良母畜的繁殖潜力,加速家畜良种扩繁。本研究以Vetoquinol FSH(V-FSH)和Puregon FSH(P-FSH)两种不同来源的促性腺激素为基础设计6种培养体系(V-FSH+LH+E2+FBS、V-FSH+FBS、VFSH+LH+E2+BSA、P-FSH+LH+E2+FBS、P-FSH+FBS、P-FSH+LH+E2+BSA),比较它们对绵羊卵母细胞成熟的影响。目的为建立一个适用于绵羊卵母细胞的IVM体系提供基础数据。本试验所获得的实验结果如下。1.V-FSH+LH+E2+FBS组的卵丘扩展指数与P-FSH+FBS组的无显著差异(分别为3.26±0.10和3.06±0.10,P>0.05),但显著高于其它各组(P<0.05)。VFSH+LH+E2+FBS组、V-FSH+FBS组、V-FSH+LH+E2+BSA组与P-FSH+FBS组的第一极体排出率无显著差异(P>0.05);P-FSH+LH+E2+FBS组(72.65%±1.64)、PFSH+LH+E2+BSA组(73.19%±0.89)第一极体排出率显著低于V-FSH+LH+E2+BSA组(83.60%±4.26,P<0.05),但与其它各组差异不显著(P>0.05)。因此使用血清更有利于卵丘扩展,但是对卵母细胞的核成熟没有明显影响。2.本实验孤雌激活胚胎发育的结果显示:V-FSH+LH+E2+FBS组、V-FSH+FBS、P-FSH+LH+E2+FBS组、P-FSH+FBS组四组之间的卵裂率无显著差异(P>0.05);VFSH+LH+E2+BSA组、P-FSH+LH+E2+BSA组两组间的卵裂率无显著差异(P>0.05);V-FSH+LH+E2+BSA组(74.28%±4.78)、P-FSH+LH+E2+BSA组(73.83%±0.69)P-FSH+LH+E2+BSA组(73.83%±0.69)的卵裂率显著低于V-FSH+LH+E2+FBS组(87.39%±1.66)、V-FSH+FBS组(87.60%±3.59)、P-FSH+LH+E2+FBS组(85.98%±6.02)、P-FSH+FBS组(90.48%±3.30,P<0.05),因此,与BSA相比较,成熟培养基中添加FBS可显著提高卵母细胞孤雌激活后胚胎的卵裂率。而且VFSH+LH+E2+FBS组(74.03%±0.03)与P-FSH+FBS组(81.05%±2.18)的囊胚率显著高于其它各组(P<0.05)。因此当使用V-FSH时,同时补充LH、E2更有利于卵母细胞的发育;当使用P-FSH时,只补充FBS就可以满足卵母细胞成熟所需。此外,各试验组间的囊胚细胞数无显著差异(P>0.05)。3.氧化还原态及细胞代谢的数据显示:V-FSH+LH+E2+FBS组、P-FSH+FBS组、P-FSH+LH+E2+BSA组的糖酵解活性较高;V-FSH+LH+E2+FBS组与PFSH+LH+E2+BSA组的氧化磷酸化水平较高;V-FSH+LH+E2+BSA组与PFSH+LH+E2+FBS组的氧化磷酸化水平较低。这表明不同培养组分下,卵母细胞代谢方式存在很大差异。总之,尽管Vetoquinol-FSH(V-FSH)与Puregon-FSH(P-FSH)对于卵母细胞成熟具有相似的生物效能,但在成熟液不同组分协同下具有不同的成熟效果,当使用垂体来源的Vetoquinol FSH(V-FSH)时TCM-199+V-FSH+LH+E2+FBS是更有效的绵羊IVM体系;当使用基因重组的Puregon FSH(P-FSH)时,TCM-199+P-FSH+FBS与TCM-199+P-FSH+LH+E2+BSA是更有效的绵羊IVM体系。
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