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动物源食品的激素残留问题已经成为了当前食品安全的热点问题之一。饲料是食源性动物摄入外源性激素的主要来源。这些激素类物质不仅会引起动物生理特征的异变，而且在动物生命代谢的过程中会残留于动物的组织肌肉、血液里，造成激素类物质残留于动物源食品，进而影响人类健康。因此，保障饲料的质量安全就是保障人类的食品安全。为了更好的监控饲料中激素类物质的水平，本文建立了固相萃取-高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法测定饲料中17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的方法。论文的主要研究内容与研究结论如下：（1）建立了固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的分析方法。研究了流动相组成、梯度洗脱条件、色谱柱类型、柱温、进样体积、流速对17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇保留时间、峰面积的影响，并结合对实际样品的分析，优化了色谱分析条件。同时研究了三种目标化合物在紫外可见光区的特征吸收光谱，确定了λ=230nm为三种目标化合物的紫外检测波长。（2）重点研究了样品前处理各部分条件对提取效率的影响。研究结果表明：固相萃取法对样品被测物质的提取效率最好，可达85%以上；当用25.0mL乙腈提取样品30.0min时，提取效果最好；比较了四种非极性填料的固相萃取小柱对样品溶液的净化效果，发现使用Heaion C18小柱，三种目标化合物的回收率最好。（3）建立了液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）测定饲料中17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的定量确证方法。优化了质谱参数；确定了17β-雌二醇和戊酸雌二醇负离子模式、苯甲酸雌二醇正离子模式的测定方式，母离子分别为271.37、355.43、377.40，同时优选了合适的定性离子对和定量离子对，分别为145.03、183.13、253.29、101.03、135.08、104.98，实现了对目标化合物的准确定性和定量；采用了17β-雌二醇13C2同位素内标消除样品基体对被测物质的影响。（4）对建立的固相萃取-高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）进行方法学考察。固相萃取-高效液相色谱法的17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的线性范围分别为0.20～120.00μg/mL、0.20～150.00μg/mL、0.20～130.00μg/mL，线性关系良好，均大于0.9999；检出限分别为0.95～1.00mg/kg、0.50～0.75mg/kg、0.80～1.00mg/kg；回收率分别为63.40%～105.55%、68.00%～103.23%、68.55%～107.95%。液相色谱串联法（LC-MS/MS）的17β-雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的线性范围分别为10.00～200.00ng/mL、5.00～200.00ng/mL、10.00～200.00ng/mL，线性关系良好，均大于0.9900；检出限分别为0.200～0.060mg/kg、0.200～0.025mg/kg、0.220～0.050mg/kg；回收率分别为64.67%～105.55%、68.33%～94.69%、68.11%～95.66%。