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目的：主要研究调衡方多糖(Tiaoheng prescription Polysaccharide ThPPs)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响，并进一步探讨调衡方多糖对信号通路干预的研究。
方法：①小鼠腹腔巨噬细胞培养并用免疫组化(F4/80、CD11b)进行鉴定；②经ThPPs干预的小鼠腹腔巨噬细胞，采用细胞增殖毒性检测试剂盒(cell counting kit-8 CCK-8)检测其增殖活性，并利用Griess试剂盒检测一氧化氮(NO)的生成水平；③用免疫组化法检测经ThPPs干预后细胞表面CD86分子及分泌的白介素12(interleukin-12 IL-12)水平；④用酶联免疫吸附(enzyme-linked imnuinocorbent assay ELISA )试剂盒测定经ThPPs干预后，巨噬细胞分泌细胞因子白介素10(interleμkin-10IL-10)和转化生长因子(Transforminggrowthfactorbeta1TGF-β1)的水平；⑤采用RT-PCR和免疫印迹法(Western blot WB)法检测ThPPs对巨噬细胞中的Toll样受体4(Toll-like receptor 4 TLR4)、核转录因子-?B(nuclear-factor-?b NF- ?B)、髓系分化因子88(myeloid differentiation primary-response protein 88 ， MyD88 )、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptorassociated factor 6，TRAF6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-αTNF-α)的表达调控。
结果：①获取的小鼠腹腔巨噬细胞经不同浓度的调衡方多糖干预后，在100-500μg/mL浓度范围内小鼠腹腔巨噬细胞活性均增加(P＜0.01)，浓度为1000μg/mL对小鼠腹腔巨噬细胞有显著抑制作用(P＜0.05)；②根据Griess试剂盒测定结果所示，LPS组小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO均显著增加(P＜0.05)；经ThPPs干预后巨噬细胞释放的NO生成量明显高于空白组，差异有统计学意义(P＜0.05)；③免疫组化爬片结果显示，经多糖干预巨噬细胞表面分子CD86及分泌的IL-12均明显增加(P＜0.01或P＜0.05)；④根据ELISA试剂盒测定结果所示，调衡方多糖干预24h后，对其分泌IL-10和TGF-β1无明显影响，差异无统计学意义(P＞0.05)；⑤运用RT-PCR和WesternBlot法检测调衡方多糖干预小鼠腹腔巨噬细胞TLR4、NF-kB、MyD88、TRAF-6及下游细胞因子TNF-α的表达水平，确定其参与反应的通路。
结论：①调衡方多糖可增强巨噬细胞的活性，浓度为500μg/ml的作用最强；②调衡方多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞，在4、8、12、24、48小时均可促进NO的释放，且在24h效果最佳，与空白组比较有明显的统计学上的差异；③调衡方多糖可有效激活巨噬细胞，增加共刺激分子CD86及炎性因子IL-12的表达(P＜0.05)，对IL-10及TGF-?1表达无影响(P＞0.05)，与空白组比较无明显统计学意义。调衡方多糖可以增加M1亚型的巨噬细胞炎症因子的表达量，诱导巨噬细胞向M1亚型转化。④调衡方多糖对小鼠腹腔巨噬细胞发挥免疫调节的作可能是通过TLR4信号通路来调节的。
方法：①小鼠腹腔巨噬细胞培养并用免疫组化(F4/80、CD11b)进行鉴定；②经ThPPs干预的小鼠腹腔巨噬细胞，采用细胞增殖毒性检测试剂盒(cell counting kit-8 CCK-8)检测其增殖活性，并利用Griess试剂盒检测一氧化氮(NO)的生成水平；③用免疫组化法检测经ThPPs干预后细胞表面CD86分子及分泌的白介素12(interleukin-12 IL-12)水平；④用酶联免疫吸附(enzyme-linked imnuinocorbent assay ELISA )试剂盒测定经ThPPs干预后，巨噬细胞分泌细胞因子白介素10(interleμkin-10IL-10)和转化生长因子(Transforminggrowthfactorbeta1TGF-β1)的水平；⑤采用RT-PCR和免疫印迹法(Western blot WB)法检测ThPPs对巨噬细胞中的Toll样受体4(Toll-like receptor 4 TLR4)、核转录因子-?B(nuclear-factor-?b NF- ?B)、髓系分化因子88(myeloid differentiation primary-response protein 88 ， MyD88 )、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptorassociated factor 6，TRAF6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-αTNF-α)的表达调控。
结果：①获取的小鼠腹腔巨噬细胞经不同浓度的调衡方多糖干预后，在100-500μg/mL浓度范围内小鼠腹腔巨噬细胞活性均增加(P＜0.01)，浓度为1000μg/mL对小鼠腹腔巨噬细胞有显著抑制作用(P＜0.05)；②根据Griess试剂盒测定结果所示，LPS组小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO均显著增加(P＜0.05)；经ThPPs干预后巨噬细胞释放的NO生成量明显高于空白组，差异有统计学意义(P＜0.05)；③免疫组化爬片结果显示，经多糖干预巨噬细胞表面分子CD86及分泌的IL-12均明显增加(P＜0.01或P＜0.05)；④根据ELISA试剂盒测定结果所示，调衡方多糖干预24h后，对其分泌IL-10和TGF-β1无明显影响，差异无统计学意义(P＞0.05)；⑤运用RT-PCR和WesternBlot法检测调衡方多糖干预小鼠腹腔巨噬细胞TLR4、NF-kB、MyD88、TRAF-6及下游细胞因子TNF-α的表达水平，确定其参与反应的通路。
结论：①调衡方多糖可增强巨噬细胞的活性，浓度为500μg/ml的作用最强；②调衡方多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞，在4、8、12、24、48小时均可促进NO的释放，且在24h效果最佳，与空白组比较有明显的统计学上的差异；③调衡方多糖可有效激活巨噬细胞，增加共刺激分子CD86及炎性因子IL-12的表达(P＜0.05)，对IL-10及TGF-?1表达无影响(P＞0.05)，与空白组比较无明显统计学意义。调衡方多糖可以增加M1亚型的巨噬细胞炎症因子的表达量，诱导巨噬细胞向M1亚型转化。④调衡方多糖对小鼠腹腔巨噬细胞发挥免疫调节的作可能是通过TLR4信号通路来调节的。