“钛骨”表面纳米掺锌钙磷涂层的骨诱导性探究

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目的:在新型种植体“钛骨”表面构建掺入不同浓度锌的纳米级钙磷涂层;通过体外细胞实验检测此种生物涂层对MG63细胞早期黏附、增殖、分化、基质矿化的影响并由此筛选出最适当掺入锌浓度。方法:运用计时电位-电化学沉积法在“钛骨”表面构建不同浓度纳米掺锌钙磷涂层;以单纯细胞组作空白对照组,纯“钛骨”组作阴性对照组,分别掺入锌的Zn/(Ca+Zn)摩尔比分别为0%、10%、20%、30%的钙磷涂层组为实验组,将材料与MG-63细胞共培养;在1h时通过DAPI染色定性检测各组黏附细胞量、于1、4、7天通过CCK-8法评估材料对细胞增殖的影响、第7天定量检测胞内AKP活性、第14天通过BCA法定量测定细胞总蛋白浓度、第9、14天通过Real-TimePCR检测成骨相关基因RUNX2、OCN、Osterix mRNA的相对表达水平、第9、14、21天通过Westernblot测定基质矿化相关蛋白Collagen I及BSP表达量。结果:1、“钛骨”表面纳米掺锌钙磷涂层可促进共培养1h后MG63细胞的早期黏附,其中掺入20%Zn-HA组及30%Zn-HA组对细胞黏附的促进作用相对更明显;2、“钛骨”表面纳米掺锌钙磷涂层在第4、7天能明显促进MG63细胞早期增殖,在第7天20%Zn-HA涂层对细胞增殖的促进作用最显著;3、与对照组相比,第7天实验组可上调MG-63中AKP活性,其中20%掺锌组的促进效果最明显;4、与空白及阴性对照组相比,20%Zn-HA组能明显促进总蛋白表达量;5、在细胞促基质矿化期的第9、14天时,20%掺锌组可上调RUNX2、OCN、Osterix mRNA表达量;6、在矿化早期及晚期,20%Zn-HA对MG-63中成骨相关蛋白Collagen I及BSP的表达量起正性调节作用。结论:1、钛骨表面纳米掺锌钙磷涂层在成骨样细胞的早期黏附、早期增殖、早期分化、后期分化、基质矿化等成骨想过过程中都能发挥积极作用;2、在掺入不同锌浓度的钙磷涂层中,20%摩尔比对成骨的促进作用最强;3、锌离子的生物活性具有浓度依赖性,30%组中释放的锌离子浓度可能存在细胞毒性。4、成骨样细胞更易在纳米级粗糙表面附着;不易在边缘尖锐的表面附着。
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