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恶性肿瘤是目前危害人类健康的重要疾病之一,其发病及转移机制是医学家们正努力研究的课题方向,也直接关系到肿瘤的防治策略。近年来肿瘤干细胞学说的提出为我们重新认识肿瘤的本质与起源,以及临床肿瘤治疗的研究提供了新的思考方向。
目的:对腺样囊性癌肺高转移细胞株(adenoid cystic carcinoma cell cloneshighly metastatic to the lung ACC-M)中不同表型的肿瘤亚群细胞的细胞膜抗原表达的差异性进行研究和分析,为今后进一步分离肿瘤干细胞打下一定的实验基础。
方法:①采用单细胞体外培养的方法了解ACC-M的分裂和增殖的特点,以探讨肿瘤干细胞存在的可能性。②利用MTT比色试验法绘制ACC-M的生长曲线③利用流式细胞仪(flow cytometry FCM)检测ACC-M肿瘤细胞的表面抗原cD24、CD44、ABCG2的表达情况。④采用免疫组化的方法检测单细胞体外培养具有增殖能力的ACC-M肿瘤细胞与常规体外传代培养的ACC-M肿瘤细胞的CD44、CD24和MMP-9表达差异度。
结果:①在单细胞体外培养6d后,ACC-M单细胞仅有8.62%持续分裂、增殖,而并非全部的细胞都发生分裂。②ACC-M的生长曲线显示细胞的倍增时间接近48小时。③免疫组化结果显示,单细胞体外培养具有增殖能力的ACC-M细胞与常规传代培养的ACC-M细胞相比,两者在CD24、CD44和MMP-9的表达上无统计学上的差异,CD44和MMP-9在ACC-M细胞中阳性表达率很高,CD24在ACC-M细胞中阳性表达率较低。④FcM检测结果显示,ACC-M细胞表面CD44<+>,ABCG2<+>和CD44<+>CD24<->的表达率分别为90.67%、8.64%和78.09%。
结论:
①OACC-M肿瘤细胞具有异质性,并不是所有的ACC-M细胞都能克隆增殖,只有一小部分细胞能不断地分裂增殖,大多数细胞最终死亡或凋亡。
②单细胞体外培养具有增殖能力的ACC-M细胞与常规传代培养的ACC-M细胞相比,CD44,CD24和MMP-9的表达无显著的增加或降低,因而对于分离ACC-M的肿瘤干细胞,CD44、CD24和MMP-9缺乏特异性。CD44和MMP-9与肿瘤的高转移性密切相关。转移潜能高的涎腺腺样囊性癌细胞具有较强的基质金属蛋白酶分泌。
③Acc-M也象某些实体瘤一样含有侧群细胞(Side population SP)。在后续的研究中,可考虑利用SP细胞的表型标记“ABCG2”,用FCM或磁珠分选技术将SP细胞从肿瘤中分离出来,通过对SP细胞的研究进一步探讨肿瘤干细胞的生物学特性。