人miR-181a转录后抑制癌基因PPFIA1对慢性粒细胞性白血病细胞增殖、凋亡及STI571敏感性的影响

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:blueskyjandy
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目的:鉴定hsa-miR-181a的候选靶基因PPFIA1,探索hsa-miR-181a对K562细胞生物学活性的影响,为白血病分子靶向治疗提供新的实验依据。方法:1.用脂质体LipofectamineTM2000介导,将化学合成的hsa-miR-181a mimics和候选靶基因PPFIA1siRNA分别转染K562细胞。通过Real-time PCR、Western blot检测细胞内PPPFIA1mRNA和蛋白的表达。2.构建双荧光素报告基因载体,通过荧光素酶活性分析hsa-miR-181a与PPFIA1的3’UTR结合。3. MTT法和台盼蓝法检测hsa-miR-181a和PPFIA1siRNA抑制K562细胞生长的量效关系和时效关系。4. Annexin V-PI双染检测hsa-miR-181a和PPFIA1siRNA对K562细胞凋亡的影响。5. MTT法检测hsa-miR-181a和PPFIA1siRNA影响K562细胞对STI571的敏感性。结果:1. hsa-miR-181a mimics和PPFIA1siRNA转染K562细胞48h后,PPFIA1mRNA和蛋白表达均明显下调。2.荧光素酶活性分析结果表明hsa-miR-181a显著降低转染PPFIA1-3’UTR质粒的293T细胞的荧光素水平,而转染PPFIA1-mut-3’UTR细胞的荧光素水平没有显著改变。3. hsa-miR-181a mimics和PPFIA1siRNA转染K562细胞48h后,细胞生长受到明显抑制,表现出剂量依赖效应,抑制时间可持续至72h。4. hsa-miR-181a mimics和PPFIA1siRNA转染K562细胞48h后早期凋亡细胞明显增多。5. hsa-miR-181a mimics和PPFIA1siRNA转染K562细胞48h后,可以提高K562细胞对STI571的敏感性。结论:1.在K562细胞中,PPFIA1是hsa-miR-181a直接的功能性靶基因之一。2. hsa-miR-181a通过靶向作用PPFIA1可以抑制K562细胞生长,促进其凋亡,提高对STI571的敏感性。hsa-miR-181a可能是白血病中一个重要的抑癌miRNA。
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