【摘 要】
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金黄色葡萄球菌可产生多种毒素,具有广泛的宿主适应性,是引发食物中毒的主要致病菌之一。实验室前期研究发现,部分食物中毒菌株中的α-溶血素存在耐热现象。因此本研究选用实验室收集的相关食物中毒金黄色葡萄球菌,并筛选其中产α-溶血素的菌株进行特性研究,包括肠毒素基因和耐药性检测,spa、MLST和hla基因分型试验。且随后构建hla基因缺失株-ΔS2SA09、回补株-r S2SA09。同时进行小鼠试验,初
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（编号:31871894,U1703119和31271858）；
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金黄色葡萄球菌可产生多种毒素,具有广泛的宿主适应性,是引发食物中毒的主要致病菌之一。实验室前期研究发现,部分食物中毒菌株中的α-溶血素存在耐热现象。因此本研究选用实验室收集的相关食物中毒金黄色葡萄球菌,并筛选其中产α-溶血素的菌株进行特性研究,包括肠毒素基因和耐药性检测,spa、MLST和hla基因分型试验。且随后构建hla基因缺失株-ΔS2SA09、回补株-r S2SA09。同时进行小鼠试验,初步研究α-溶血素在食物中毒菌株中的毒力影响。本研究的主要结果如下:（1）本实验室共分离鉴定263株食物中毒菌株,其中215株（81.75%）菌株hla基因检出为阳性。随后将这些阳性菌株进行热处理,100℃、8 min后,仍然具有溶血活性的菌株有144株（66.98%）。其中,显示I型溶血现象的菌株有26株,II型溶血现象有60株,III型溶血现象有58株。（2）144株产α-溶血素的食物中毒菌株,扩增21种肠毒素基因,sea、see基因检出率较高,其次是sem、sen、seg、sei和seo,说明新型肠毒素在食物中毒过程中也起着重要作用。菌株中同时可携带最多9种肠毒素基因,共发现48种毒素基因谱,且存在毒素基因连锁出现的现象,如egc基因簇,sec和sel,sed和sej;15种抗生素中,菌株对PEN、T/S、AMP和A/C有较强的耐药性,此外所有菌株均对VAN、OXA、RIF和AMK抗生素敏感,其中耐药谱出现频率最高的是AMP-T/S-A/C-PEN。多重耐药中,大多数菌株耐3～6种抗生素,占菌株总数的92.37%。最常见的是4重耐药菌株,最多可同时耐7种抗生素。（3）144株产α-溶血素的食物中毒菌株,共发现37种spa型和16种ST型。spa分型中,占主导地位的是t091和t701,检出率都是21.53%（31/144）,而t127分布与溶血现象相关;MLST分型试验中,占主导地位的ST型是ST6和ST7,分别占29.86%（43/144）和22.92%（33/144）。同时e BURST v 3.0软件分析得出10种CC型,CC5型的菌株数量最多;此外,对不同溶血现象的菌株进行hla基因分型,共发现6种基因型,并根据核苷酸序列的不同得出5种多肽型。其中hla基因型和溶血表型之间未明显相关,但hla基因型和ST型之间的联系较为密切。（4）本研究成功构建了hla基因的缺失株（ΔS2SA09）和回补株（r S2SA09）,并进行了菌株的筛选和验证,以便于后续试验的开展。同时进行小鼠毒力试验。其中S2SA09和r S2SA09的小鼠致死率均为100%（10/10）,而不表达α-溶血素的ΔS2SA09实验组小鼠均未死亡,说明α-溶血素的表达会增强食物中毒菌株的毒力。
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