蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb.）Trev.）是一种多年生药用蕨类植物,民间常用于跌打损伤,活血化瘀等。近年研究表明,该植物中的生物碱——石杉碱甲（Hup A）对阿尔兹海默症具有显著的疗效。但是目前蛇足石杉全球资源紧缺,人工繁育蛇足石杉存在技术上的瓶颈,化学合成的石杉碱甲生物活性和安全性远不及天然石杉碱甲,这就使得寻求新的石杉碱甲来源迫在眉睫。蛇足石杉中含有大量的内生真菌,内生真菌的次生代谢产物十分丰富,本研究通过分离蛇足石杉中的内生真菌,以期找到产石杉碱甲的真菌;通过研究菌株的发酵特性,为以后规模发酵生产石杉碱甲提供理论依据;并对内生真菌的次生代谢产物进行分离,通过细胞毒活性实验,进一步寻找活性成分。主要研究内容及结果如下:（1）从蛇足石杉中共分离得到57株内生真菌,经过ITS鉴定这些内生真菌分布于20个属29个种,其中属于镰刀菌属（Fusarium sp.）的内生真菌最多有9株,属于毛壳菌属（Chaetomiun sp.）的内生真菌有8株,属于刺盘孢属（collectotrichum sp.）的内生真菌有4株,属于木霉属（Trichoderma sp.）的有4株,属于节菱孢属（Arthrinium sp.）的有4株,属于无柄盘菌属（Pezicula sp.）的有3株,其余20株内生真菌分布于其他14个属。这些内生真菌有39株来自于蛇足石杉的叶片,12株来自于茎,6株来自于根,本次分离结果表明叶片中的内生真菌最为丰富,茎次之,根最少。（2）采用空白加标回收的方法,对比不同条件处理下Hup A的回收率,优化提取总生物碱的方法,并对前期分离得到的内生真菌进行发酵培养。通过HPLC技术对内生真菌菌丝中的总生物碱进行初步检测,发现68号样品具有和石杉碱甲标品一致的保留时间,为了进一步确认,通过LC-MS技术检测到该样品的MS及MS/MS都与石杉碱甲标品一致,因此确认68号菌株可以产生石杉碱甲,并将其命名为NWUHS001,同时将该菌株送至中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）进行鉴定及专利保藏（CGMCC NO.:16786）。经鉴定该菌株为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。并对其发酵特性进行了研究,结果表明,在发酵生长第六天时Hup A产量最高,为1.46μg/g CDW,此外还对该菌株进行了继代培养,发现内生真菌的Hup A产量逐渐降低,存在一定程度的菌种退化。（3）通过乙酰胆碱酯酶抑制实验初步判断了NWUHS001的粗提物活性,IC₅₀为0.055mg/m L,通过前期HPLC对样品的检测可知,该菌株的次生代谢产物中除了石杉碱甲之外,还有其他组分。为了进一步研究NWUHS001的次生代谢物,发酵共得239.2804g干菌丝,通过制备液相分离得到化合物A,经过NMR中¹H-NMR、¹³C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC数据结合质谱数据鉴定化合物A为pterosin B。（4）采用CCK-8法对pterosin B进行细胞毒活性实验,选取4种具有代表性的人源肿瘤细胞系,人肝癌细胞系Hep G2,人肺癌细胞系H226,人表皮癌细胞系A431,人胰腺癌细胞系PANC1,测试该化合物对这些肿瘤细胞的体外抑制作用,结果表明pterosin B对于Hep G2具有很好的抑制效果,IC₅₀为0.1705μmol/m L,但对其他细胞系并未表现出强烈的抑制效果。