凉粉草精油微乳液的制备及其稳定性和活性研究

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凉粉草是唇形科凉粉草属一年生草本植物,国内凉粉草资源丰富,价格低廉,但加工利用程度较低。凉粉草精油是凉粉草的天然次级代谢产物,其附加值高,具有许多潜在的生物活性,但水溶性和稳定性差的缺点限制了其应用。因此,本文分析了凉粉草精油的化学组成并制备得到凉粉草精油微乳液,研究了组成与比例对微乳液形成的影响,评价了凉粉草精油微乳液的稀释、贮藏和模拟体外消化稳定性,对比研究了凉粉草精油及其微乳液的抗氧化和抗增殖活性。本文的主要研究结果如下:(1)运用水蒸气蒸馏法提取得到凉粉草精油,经GC-MS联用技术确定含量较高的主要组分分别为:香树烯(25.53%)、β-石竹烯(19.31%)、异石竹烯(11.30%)、甲位葎草烯(8.30%)和佛术烯(7.62%)。通过比较伪三元图的面积以研究不同组成与比例对微乳液形成的影响,得到以Tween 60为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂,Km=2:1和Smix=8:2的凉粉草精油微乳液,并发现微乳液对离子强度、p H值等环境因素有较好的稳定性。微乳体系的电导率和粘度变化以及亚甲基蓝染液的扩散情况表明,水分含量为0-30%时,为W/O型微乳液;水分含量为30-60%时,为B.C型微乳液;水分含量大于60%时,则为O/W型微乳液。(2)凉粉草精油微乳液经去离子水多倍稀释后,粒径变得更小、分布更集中,具有良好的稀释稳定性。在室温和4℃条件下贮藏60天的过程中,凉粉草精油微乳液的粒径和PDI都在较小范围内波动,说明体系在长期贮藏过程中具有较好的稳定性。在模拟体外消化实验中,发现凉粉草精油微乳液在口腔相和胃相的粒径、PDI、p H值和电导率变化较小,而在肠相中的对应指标均发生较大的变化。用透射电镜表征微观形貌,发现口腔相与胃相的粒径大小接近原始状态,有较好的球形轮廓,而肠相的图像中出现了一些不定形结构,粒径有所增大。此外,在体外释放实验中,微乳体系在口腔相和胃相中都有一定的凉粉草精油释放,而在肠相中精油释放率明显增大。以上结果表明凉粉草精油微乳液在口腔相和胃相有较好的稳定性,而在肠相中有一定的定向释放作用。(3)通过五种不同的抗氧化方法(DPPH法、ABTS法、还原力法、ORAC法和PSC法)评价凉粉草精油及其微乳液的抗氧化活性。经微乳化处理后,在DPPH法和ABTS法实验中,凉粉草精油的抗氧化活性略有提升,在还原力法、ORAC法和PSC法实验中,凉粉草精油的抗氧化活性分别显著提升了17%、2.6倍和8.4倍,说明微乳化技术能够在不同程度上提高凉粉草精油在水环境中的抗氧化活性。(4)三种不同的肿瘤细胞株(Hep G2、A375和MDA-MB-231细胞)被用于对比评价凉粉草精油及其微乳液的抗增殖活性,结果发现,微乳化技术能够显著提升凉粉草精油对三种肿瘤细胞的抗增殖活性。采用流式细胞术研究凉粉草精油微乳液对MDA-MB-231细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响,结果显示,细胞的G0/G1期细胞数量百分比和总凋亡细胞数量百分比均显著上升,说明凉粉草精油微乳液能够将MDA-MB-231细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡的发生。通过RT-q PCR技术检测MDA-MB-231细胞抗增殖相关基因表达量的变化,发现凉粉草精油微乳液的抗增殖机制可能为,一是通过下调Cyclin E和CDK2的表达,以干扰细胞从细胞周期G0/G1期进入S期;二是通过下调PI3K、AKT和Bcl-2的表达,上调BAD的表达,调控PI3K/AKT/BAD/Bcl-2通路以诱导细胞进入凋亡程序。
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