肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是一组非常常见的慢性肝疾病的病理学综合征。在整个肝纤维化的发生发展过程中，肝细胞内会发现许多基因的发生异常表达，并增加发展为肝细胞性癌的危险性。在肝纤维化的发生过程中，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化增殖是其中的一个重要环节。肝星状细胞位于窦周Disse间隙内，在正常状态下，HSC主要储存和代谢维生素A，合成与分泌少量的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）。当HSC受刺激过度激活时，转变成具有增生活性的、产生纤维的具收缩特性的肌成纤维细胞并表达α平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin，α-SMA)合成异常增多的ECM超过肝清除能力导致其在肝内聚集是肝纤维化形成的重要机制。有研究表明适当浓度的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可刺激HSC，使其提高增殖率和表达细胞内胶原增强。LPS诱导的细胞模型能够较好地模拟出肝纤维化形成过程中HSC在数量和功能方面的主要改变，为HSC活化的研究提供了一个较为全面的细胞模型。　　小泛素相关修饰物（small ubiquitin-like modifier, SUMO）基因家族有四个家庭成员，其通过共价连接修饰靶蛋白，并参与蛋白质间的相互作用，调控细胞内靶蛋白分布及其功能。我们研究发现随着肝纤维化程度的加深，SUMO-1的表达增强。SUMO-1可能通过大量增强TGF-β1以及PDGF的表达，进而促进HSC的增殖和活化，促进其分泌大量胶原，并减少胶原降解而导致大量胶原异常沉积，表现出的作用是促进肝纤维化。SUMO-1可可以修饰其他生长因子，维持相关蛋白质的稳定性，从而调控肝纤维化甚至的肝癌的发展过程。因此，我们设计该实验进一步研究SUMOs在肝纤维化过程中的作用及其机制，为肝纤维化的治疗提供新的思路。本实验首先利用Western blot及定量PCR检测LPS刺激HSC-T6模拟肝纤维化的过程中SUMO-1表达水平的变化，进一步了解SUMO-1在肝纤维化中的作用。然后我们通过针对SUMO-1慢病毒转染LPS激活后的HSC-T6，利用Western blot及定量PCR证实SUMO-1的表达水平的确得到干扰及上调，再利用流式细胞仪检测转染后各组细胞株的细胞周期及凋亡，以期阐明SUMO-1在肝纤维化中的作用机制。　　第一部分不同浓度LPS刺激HSC-T6 SUMO-1的表达水平变化　　目的:　　探讨能模拟肝纤维化时LPS刺激大鼠肝星状细胞的最佳浓度　　方法:　　分别用终浓度为0，1ug/ml，10ug/ml，100ug/ml，200ug/ml的LPS刺激HSC-T624小时后分别提取RNA及蛋白质，后利用定量PCR及western blotting检测SUMO-1的表达水平及利用western blotting检测α-SMA的表达水平。　　结果:　　定量PCR发现浓度为的10ug/ml LPS刺激HSC-T6其SUMO-1的表达水平最高，各组差异具有统计学意义(P＜0.05)。Western blot验证SUMO-1上述规律并且与α-SMA的表达规律一致，各组差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　结论:　　LPS能够有效激活HSC-T6，在浓度为的10ug/mlLPS可最好模拟肝纤维化，与SMUO-1的表达规律一致。结果说明SMUO-1可能在LPS激活HSC-T6过程中取到一定作用。　　第二部分SUMO-1表达变化后对HSC-T6增殖的影响及其机制研究　　目的:　　初步探索SUMOs在HSC-T6激活过程中的作用及其机制　　方法:　　将人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA慢病毒及SUMO-1过表达慢病毒载体转染HSC-T6，采用定量PCR和Western blot方法检测转染后HSC-T6中SUMO-1的表达变化，并利用流式细胞仪检测HSC-T6的周期及凋亡。后用Realtime PCR检测SUMO-2及SUMO-3的表达水平。　　结果:　　人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA慢病毒能抑制肝星状细胞中SUMO-1基因的表达但SUMO-2及SUMO-3的表达上调，而SUMO-1过表达慢病毒载体转染肝星状细胞后SUMO-1表达增强但SUMO-2及SUMO-3的表达水平下调，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。转染后HSC-T6的周期及凋亡，各组差异无统计学意义(P＞0.05)。　　结论:　　SUMO-1 siRNA沉默肝星状细胞中SUMO-1基因效果良好但与SUMO-2和SUMO-3的表达水平呈现相反的趋势，HSC-T6的周期及凋亡均未出现明显变化。本部分结果说明SUMOs中各族基因在功能上可互补并共同导致HSC-T6的激活。