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本研究合成3-(4,6-二氨基-1,3,5-三嗪-2-基硫代)丙酸作为三聚氰胺半抗原,分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫抗原和包被抗原。用合成的免疫原免疫动物,制备了高效价的抗三聚氰胺血清。血清经确证后建立了检测动物源性食品中三聚氰胺残留的间接竞争ELISA方法。并将血清纯化,偶联经CNBr活化的Sepharose4B制备三聚氰胺免疫亲和柱层析柱,测定了免疫亲和层析柱对三聚氰胺的柱容量、回收率及重复使用性,建立了检测动物源性食品中三聚氰胺残留的免疫亲和层析-高效液相色谱检测方法。结果如下：1三聚氰胺氰胺特异性抗体的制备利用三聚氰胺结构类似物2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪与3-巯基丙酸在碱性环境下反应成半抗原3-(4,6-二氨基-1,3,5-三嗪-2-基硫代)丙酸,经红外光谱和质谱法鉴定合成成功。将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原Mel-BSA和Mel-OVA,经紫外光谱法鉴定偶联成功,经计算Mel-BSA、Mel-OVA的半抗原结合比为12.6：1,6.5：1。将Mel-BSA作为免疫原免疫实验兔制备抗血清。以Mel-OVA为包被原,利用间接ELISA法检测抗血清效价,制备的抗血清效价为1：23×103。2.三聚氰胺ELISA检测方法的建立包被抗原与抗血清的最佳工作浓度分别为1μg/ml和1：2000。用抗三聚氰胺血清建立了三聚氰胺的间接竞争ELISA标准曲线,三聚氰胺抑制抗血清的标准曲线的线性回归方程为y=-0.3494x+1.1872,半数抑制量为92.64ng/mL最低检测限为3.89ng/mL,线性范围为3.89～500ng/mL,其灵敏度符合目前对三聚氰胺的检测需要。检测抗体的特异性,除环丙氨嗪外,与三聚氰酸、四环素、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺、氨苄青霉素没有交叉反应,说明抗血清的特异性良好。该检测方法的精密度符合要求,批内变异系数在5.23%以内,批间变异系数在10.13%以内。添加浓度在10～400ng/ml范围,三聚氰胺在牛奶、鸡蛋中的添加回收率分别在78.60～92.38%和79.43～90.82%,达到了ELISA方法对准确度的要求。3三聚氰胺IAC-HPLC检测方法的建立将制备的三聚氰胺特异性抗血清经饱和硫酸铵法提纯。将纯化的蛋白与CNBr活化的Sepharose4B偶联,偶联率达到90.8%,装柱得到三聚氰胺特异性IAC柱。采用HPLC检测方法对IAC柱进行评价,IAC对三聚氰胺的动态柱容量为1046.3±17.2ng/mL,绝对柱容量为121.5ng/mg IgG。以IAC柱为样品净化手段建立了牛奶和鸡蛋中三聚氰胺残留量的IAC-HPLC检测方法,在本研究的色谱条件下,三聚氰胺标准工作液在50-5000ng/ml范围内,具有良好的线性关系(R2≥0.999)。牛奶和鸡蛋中三聚氰胺添加浓度为30,400,1000ng/mL时,回收率分别在86.92～95.29%和82.83～95.82%之间。牛奶和鸡蛋样品中三聚氰胺的检测限为20ng/mL,定量限为30ng/mL。