【摘 要】
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T20作为第一个被FDA批准用于临床的膜融合抑制剂,为治疗HIV的感染开辟了一个新领域,T20作为高效抗逆转录病毒疗法（HAART）的补充措施,能在一定程度上减少病人治疗的痛苦,但由于T20在临床使用中存在易产生耐药,半衰期短,注射频繁以及成本昂贵等缺点,大大限制了 T20在临床应用。在前期的工作中我们将软脂酸（C16）取代了 T20 C末端TRM区后获得新型膜融合抑制剂LP-40,LP-40抑制
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T20作为第一个被FDA批准用于临床的膜融合抑制剂,为治疗HIV的感染开辟了一个新领域,T20作为高效抗逆转录病毒疗法（HAART）的补充措施,能在一定程度上减少病人治疗的痛苦,但由于T20在临床使用中存在易产生耐药,半衰期短,注射频繁以及成本昂贵等缺点,大大限制了 T20在临床应用。在前期的工作中我们将软脂酸（C16）取代了 T20 C末端TRM区后获得新型膜融合抑制剂LP-40,LP-40抑制病毒入侵和融合活性,以及与gp41 NHR结合的能力都得到显著的提高,这些结果都指示LP-40具有很好的临床应用前景,但其是否能克服T20的耐药缺点,成为新一代临床应用药物呢?LP-40的耐药机制的研究就凸显其重要性。本课题主要对比了 T20和LP-40体外诱导耐药曲线和耐药突变明确了 T20和LP-40的主要耐药点和耐药机制。本课题中我们提取了在T20和LP-40不同浓度下的培养上清液中病毒RNA,动态的跟踪了 HIV-1NL4-3在体外诱导耐药过程中产生的耐药突变,体外诱导耐药曲线表明LP-40的耐药屏障得到明显的提高;我们分别选取了 T20浓度为12μM、200μM、400μM 和 2000μM 时和 LP-40 浓度为 300nM,8μM,20μM 和 200μM 的耐药株进行研究。最终我们筛选得到了 18株T20耐药毒株和15株LP-40耐药毒株。通过对比两种药物下的耐药株突变,我们发现T20和LP-40的耐药突变多集中在gp41的3342位区域。此外,我们新发现了一个对LP-40有耐药性的突变点G20V,可能是因为G20V影响了 LP-40的脂肪酸区域锚定在细胞膜上。在T20和LP-40耐药株中都同样出现了代偿突变N126K,此外也在CHR区域中发现由8个氨基酸组合的点突变-NDQEEDYN,结果表明NDQEEDYN可以提高Env的融合能力,NDQEEDYN 对 LP-40,C34 和 SFT 都有着轻度耐药（3.67-8.32 倍）;当 NDQEEDYN和耐药突变L33S/I37T和L33S/V38A/N42T一起出现时,突变株对LP-40,C34和SFT耐药倍数得到大幅度提升,甚至对长肽抑制剂T2635都表现出了中等耐药（7.49倍和7.85倍）,但对包含有TRM区的T20和T1249的协同耐药作用不明显。分析晶体结构时发现NDQEEDYN可以提高病毒内源性6-HB的稳定性,可能这是NDQEEDYN提高入侵与融合能力的原因和对不同膜融合抑制剂都产生耐药的耐药机制。本课题以T20和LP-40的耐药株为研究对象,分析对比T20和LP-40的耐药突变,并从结构学揭示了其突变造成耐药的机制,为更多的了解HIV-1适应性进化,开发新型膜融合抑制剂提供了新思路。
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