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第一部分：人神经母细胞瘤SD幼鼠模型的制备目的：通过直视注射法将人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞接种到幼年SD大鼠左侧肾上腺区肾筋膜内,建立人神经母细胞瘤SD幼鼠模型,为后期实验操作提供动物模型支持。方法：体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,采用开腹直视注射法将对数生长期肿瘤细胞接种到幼年SD大鼠左侧肾上腺区肾筋膜内,接种1～3×107/ml的单细胞悬液0.2ml。在肿瘤接种后第5天开始,定期B超、彩色多普勒血流成像检查,观察肿瘤影像学表现,肿瘤平均体积变化并绘制肿瘤生长曲线；在肿瘤接种后第7天,随机处死荷瘤鼠,进行大体解剖和病理学检查,HE染色观察肿瘤组织形态学并采用免疫组织化学方法检测神经母细胞瘤特异性标志物神经元特异性烯醇酶(Neurone specific enolase, NSE)的表达；判断肿瘤接种成功率。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。结果：神经母细胞瘤SD幼鼠模型成功率高达100%(35/35),本组发生全身转移且伴有明显恶病质体征的SD幼鼠3只,其余32只为接种部位局部肿瘤生长。种瘤接种5天后B超可清晰定位观察肿瘤,并彩色多普勒血流成像显示肿瘤边缘血供丰富；随后定期B超监测提示,接种9～12天肿瘤生长迅速,17天左右肿瘤开始缩小；2只荷瘤鼠在肿瘤接种1个月后发生肿瘤消退,其均在3个月后发生肿瘤消退。病理组织学可见肿瘤细胞排列紊乱呈团巢状,瘤细胞呈圆形、卵圆形或不规则形,可见较多病理性核分裂相。免疫组织化学检测肿瘤组织NSE阳性表达率为100%。结论：成功建立人神经母细胞瘤SD幼鼠模型,成瘤时间短且肿瘤血供丰富。该模型制备简便、稳定、成功率高且易于观察,为肿瘤细胞在正常免疫机体内生长的生物学特性打下良好的基础,为局部肾上腺区肿瘤的物理治疗学相关研究提供一个经济理想的实验动物模型。第二部分：HIFU消融对人神经母细胞瘤SD幼鼠模型肿瘤转移的影响目的：探讨HIFU消融人神经母细胞瘤SD幼鼠模型后能否抑制肿瘤转移的发生及其具体作用机制。方法：建立人神经母细胞瘤SD幼鼠模型,接种后第7-9天肿瘤最长径约1.0～1.5cm,将荷瘤鼠随机分为HIFU治疗组和手术治疗组,并建立正常对照组。于治疗第3天、第14天、第28天分别取靶区肿瘤组织(HIFU组)、肿瘤边缘皮肤肌肉组织和其他邻近器官(肾脏、肾上腺、脾、肝、肠管、肺脏等),解剖及病理HE染色观察肿瘤的组织学改变,比较肿瘤治愈情况及肿瘤转移病灶情况；于治疗后第3天、第1周、第2周、第3周和第4周分别进行B超和彩色多普勒血流成像监测观察肿瘤消融情况(HIFU组)、瘤体血流灌注情况及肿瘤转移病灶情况；并于治疗前,治疗后第3天、第14天、第28天分别采集外周血,应用流式细胞术(FCM)测定荷瘤鼠外周血T淋巴细胞及其亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的变化,并于正常对照组比较；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清VEGF的变化,并于正常对照组比较。以上所得数据根据资料不同分别采用x2检验,方差分析等进行统计学分析。结果：HIFU组与手术组比较,肿瘤治愈率(88.9%比48.9%)增高(P<0.01)。大体解剖及病理组织学观察分析,HIFU治疗组肿瘤转移率低于手术治疗组,每组荷瘤鼠在治疗后3天、2周及4周肿瘤转移率分别为6.7%(1/15)比46.7%(7/15),20%(3/15)比60%(9/15),0(0/15)比46.7%(7/15),两组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。B超和彩色多普勒血流成像监测提示：HIFU治疗后,CDFI在靶区未测及任何血流信号,并于治疗后3-7天B超示肿瘤内部可见形状不规则,大小不等的小片状无回声区,或点簇状高回声钙化影；HIFU治疗组有4只(4/45,8.9%)发现转移病灶；手术治疗组有20只发现转移病灶(20/45,44.4%),两组差异有显著性(P<0.01)。与治疗前比较,HIFU治疗后荷瘤鼠外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞(P<0.05)增加,CD4+/CD8+比值(P<0.05)升高,CD8+T淋巴细胞(P<0.05)降低,手术组治疗前后各指标均无明显差异(P>0.05)；HIFU治疗组和正常对照组CD3+、CD4+T淋巴细胞(P<0.05), CD4+/CD8+(P<0.05)比值明显高于手术组,CD8+T淋巴细胞(P<0.05)低于手术组,差异有显著的统计学意义,HIFU组与正常对照组比较,各指标均无明显差异(P>0.05)。与治疗前比较,HIFU治疗荷瘤鼠后血清VEGF蛋白的表达量明显降低,且在术后3天、2周、四周其血清VEGF蛋白表达量分别低于同期手术组,尤其是在2周、四周时差异有统计学意义(P<0.01)；与治疗前比较,手术组荷瘤鼠血清VEGF蛋白的表达量降低,在第14天差异有统计学意义(P<0.05)；与正常对照组比较,HIFU组与手术组荷瘤鼠在治疗前血清VEGF蛋白表达量明显增高(P<0.01)；HIFU治疗后,血清VEGF蛋白表达量较正常组增高,但仅在治疗后第三天有统计学意义(P<0.01)；手术治疗后血清VEGF蛋白表达量较正常组明显增高(P<0.01)。结论：HIFU消融人神经母细胞瘤SD幼鼠模型后,能抑制促血管生成因子VEGF蛋白在宿主外周血中的表达,同时也可以增强宿主的细胞免疫功能,从而抑制肿瘤的增生和转移,加强HIFU治愈肿瘤的效果,为临床HIFU治疗儿童实体肿瘤提供实验基础。