【摘 要】
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[目的]不同部位脂肪组织可诱导肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白发生变化而导致胰岛素抵抗;艾塞那肽是一种GLP-1受体激动剂,用于治疗2型糖尿病;我们旨在探究艾塞那肽对不同部位脂肪组织影响的肝细胞胰岛素IRS2/PI3K/Akt2信号通路关键蛋白是否存在影响。[方法]1.根据分组培养人HepG2细胞,分为（1）HepG2组;（2）HepG2+VAT组;（3）HepG2+SAT组;（4）HepG2+VAT
【基金项目】
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白求恩·三生糖尿病阳光基金； 国家自然科学基金（81660141）； 云南省代谢性疾病临床医学研究中心基金（202102M100056）；
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[目的]不同部位脂肪组织可诱导肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白发生变化而导致胰岛素抵抗;艾塞那肽是一种GLP-1受体激动剂,用于治疗2型糖尿病;我们旨在探究艾塞那肽对不同部位脂肪组织影响的肝细胞胰岛素IRS2/PI3K/Akt2信号通路关键蛋白是否存在影响。[方法]1.根据分组培养人HepG2细胞,分为（1）HepG2组;（2）HepG2+VAT组;（3）HepG2+SAT组;（4）HepG2+VAT+EXE 组;（5）HepG2+SAT+EXE 组（6）HepG2+TritonX-100组,（2）至（5）组为共培养组,利用transwell小室将下室的HepG2细胞和上室的脂肪组织共培养,其中（4）组和（5）组transwell小室下室加入了 EXE。2.共培养结束后,去除transwell小室和脂肪组织,收集（1）至（6）组HepG2细胞上清液用ELISA法检测LDH判断HepG2存活情况,收集（1）至（5）组HepG2细胞上清液用ELISA法检测脂肪因子含量。3.将（1）至（5）组人HepG2细胞用不含或者含胰岛素的培养基处理10分钟,即分为以下 10 组:（1）HepG2 组;（2）HepG2+VAT 组;（3）HepG2+SAT 组;（4）HepG2+VAT+EXE 组;（5）HepG2+SAT+EXE 组;（6）HepG2+insulin 组;（7）HepG2+VAT+insulin 组;（8）HepG2+SAT+insulin 组;（9）HepG2+VAT+EXE+insulin组;（10）HepG2+SAT+EXE+insulin 组,然后收集人 HepG2 细胞,用 Western blot检测胰岛素信号通路IRS2/PI3K/Akt2中关键蛋白IRS2、p-IRS2（S731）、PI3K-p85、Akt2及p-AKt2（S473）的表达情况。[结果]（1）各培养组培养结束后的HepG2细胞图片和LDH含量提示各培养组的HepG2细胞仍有一定活力,可以进行后续实验;（2）HepG2+VAT组或HepG2+SAT组培养结束后,HepG2细胞上清液中IL-8、MCP-1、VEGF和sTNFR2这四个脂肪因子含量均显著升高,并且HepG2+VAT组比HepG2+SAT组上清液中 IL-8、MCP-1、VEGF 和 sTNFR2 升高明显;（3）HepG2+AT+EXE 组中 HepG2细胞上清液中IL-8、MCP-1、VEGF和sTNFR2较HepG2+AT组明显下降;（4）基础状态和胰岛素刺激后HepG2+AT组HepG2细胞中IRS2表达较HepG2组明显降低,并且VAT比SAT抑制明显,而EXE能够上调AT抑制的HepG2细胞中IRS2表达;（5）基础状态和胰岛素刺激后HepG2+AT组HepG2细胞中p-IRS2（S731）表达较HepG2组均升高,EXE能够一定程度改善AT升高的HepG2细胞中p-IRS2（S731）表达;（6）基础状态和胰岛素刺激后HepG2+AT组HepG2细胞中PI3K-p85表达较HepG2组明显降低,VAT 比SAT作用明显,而EXE能够上调抑制的HepG2细胞中PI3K-p85表达;（7）基础状态和胰岛素刺激后HepG2+AT组HepG2细胞中Akt2表达均较HepG2组无明显变化,EXE对HepG2+AT组的HepG2细胞中Akt2表达亦无明显影响;（8）基础状态和胰岛素刺激后HepG2+AT组HepG2细胞中p-AKt2（S473）表达较HepG2组均降低,且VAT比SAT作用明显,而EXE可改善AT降低的HepG2细胞中p-AKt2（S473）表达。[结论]（1）不同部位脂肪组织可导致肝细胞胰岛素信号通路IRS2/PI3K/Akt2通路关键蛋白表达发生变化而导致胰岛素抵抗,并且VAT 比SAT作用更为明显;（2）不同部位脂肪组织分泌的脂肪因子存在差异,VAT可分泌更多的促炎性脂肪因子,这可能是VAT 比SAT所导致的胰岛素抵抗显著的原因之一;（3）艾塞那肽可降低VAT和SAT分泌的IL-8、MCP-1、VEGF和sTNFR2浓度,这可能是艾塞那肽改善肝细胞胰岛素抵抗的原因之一;（4）艾塞那肽可改善肝细胞胰岛素信号通路IRS2/PI3K/Akt2通路关键蛋白表达而提高肝细胞胰岛素敏感性。
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