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目的：通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术沉默人绒毛膜癌高侵袭力细胞株JEG-3中uPA基因的表达,观察uPA的表达抑制后VEGF-B、MMP-2基因的表达变化及对JEG-3细胞侵袭能力的抑制作用,揭示uPA、VEGF-B、MMP-2在绒癌细胞侵袭转移的作用机制及其关系,为后续的以uPA基因为靶点的绒癌基因治疗研究奠定基础。方法：(1)构建靶向人uPA基因的shRNA曼病毒载体(即pLKD-uPA-shRNA)并行PCR鉴定、测序分析,包装病毒后测定病毒滴度。(2)分别以仅添加等量培养液(空白对照组)、空载慢病毒(阴性对照组)、pLKD-uPA-shRNA (干扰组)感染绒毛膜癌高侵袭力细胞株JEG-3细胞。(3)应用实时定量PCR (quantitative Real-Time PCR)检测感染前后uPA、VEGF-B、MMP-2mRNA表达量的变化。(4) Transwell体外侵袭试验检测感染前后细胞侵袭能力的变化。结果：(1)经阳性克隆PCR鉴定及测序分析显示能表达uPA shRNA的慢病毒载体构建正确。(2)包装慢病毒后,滴度检测为7.36×106Tu/m1。(3) qRT-PCR检测显示：空白对照组、阴性对照组、干扰组中uPA mRNA相对表达量分别为1.025±0.267、0.800±0.099、0.066±0.021,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰组与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4) qRT-PCR检测显示：空白对照组、阴性对照组、干扰组中VEGF-B mRNA相对表达量分别为1.061±0.410、0.789±-0.223、0.061±0.036,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰组与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(5) qRT-PCR检测显示：空白对照组、阴性对照组、干扰组中MMP-2mRNA相对表达量分别为1.009±0.161、0.717±±0.222、0.071±0.021,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰组与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(6) Transwell体外侵袭实验检测显示：空白对照组、阴性对照组、干扰组JEG-3细胞穿膜数分别为200.00±11.13、205.00±14.52、61.33±2.08,干扰组穿膜细胞数显著减少,与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：(1)慢病毒介导的uPA shRNA可以有效感染JEG-3细胞并显著沉默uPA基因的表达,是一种有效的基因沉默方法之一(2)通过沉默uPA基因的表达,可以显著抑制绒癌高侵袭力细胞株JEG-3的侵袭能力,表明uPA在绒癌侵袭转移中起着重要作用。(3)uPA的沉默可以下调VEGF-B、MMP-2的表达。uPA沉默后可能是通过抑制VEGF-B、MMP-2的表达,增强其抑制绒癌细胞的侵袭能力。