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目的调查肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌中质粒介导头孢菌素酶(AmpC酶)和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的基因型分布、耐药性及流行趋势。方法收集中南大学湘雅三医院2005年9月到2006年8月头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌、15株肺炎克雷伯菌。根据头孢菌素酶和超广谱β内酰胺酶各种已知基因序列设计引物，进行聚合酶链反应及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布；接合试验证实酶基因有无可转移性；脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系；琼脂二倍稀释法测定抗生素对产AmpC酶菌株的最低抑菌浓度(MICs)。结果质粒AmpC酶的发生率，肺炎克雷伯菌为8.34％(5／60)，大肠埃希菌为8.92％(14／157)。5株肺炎克雷伯菌均产DHA-1型AmpC酶及TEM-1酶，4株同时产CTX-M-3，1株同时产SHV-83型ESBL。13株大肠埃希菌产CMY型类似AmpC酶，同时产TEM-1酶，有2株同时产CTX-M-3型ESBLs。1株大肠埃希菌产DHA-1型AmpC酶，并同时产SHV-83型ESBL。1株肺炎克雷伯菌及3株大肠埃希菌都可将头孢西丁耐药性传给受体菌。PFGE发现这19株菌来自多个不同的克隆株。结论我院肺炎克雷伯菌中发现5株产DHA-1型AmpC酶；同时产TEM-1酶、CTX-M-3或SHV-83型ESBL。大肠埃希菌中发现13株产CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶，同时产TEM-1酶、CTX-M-3或SHV-83型ESBL。我院已经发现产质粒介导AmpC酶菌株，其耐药性能够水平传播。药敏检测结果显示对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药，对亚胺培南敏感。PFGE证实它们来自不同的克隆。