第一部分:果糖诱导非酒精性脂肪性肝病小鼠动物模型的构建和评价目的:建立高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠模型,并评价其特征。方法:C57BL/6小鼠给予含30%（w/v）果糖的蒸馏水饲养8周,对照组给予蒸馏水饲养。分别于第2、4、6和8周测量小鼠的体重及肝脏重量,并计算肝脏指数。采用试剂盒测定血清中各类脂质含量,同时测定小鼠空腹血糖（FPG）、空腹血清胰岛素（FINS）含量并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。取小鼠肝脏,行HE染色和油红O染色,观察组织病理学变化。结果:与对照组相比,NAFLD小鼠的体重、肝脏重量和肝脏指数均显著增加（P<0.05）。高果糖饮水能显著增加血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和游离脂肪酸（FFA）含量,显著降低血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量（P<0.05）。HOMA-IR在模型组小鼠中持续升高,直至8周时为对照组的5.8倍,差异具有统计学意义（P<0.05）。组织病理学结果表明,该模型小鼠在第2周即出现肝脏脂滴,随着建模时间延长,在第8周时脂滴逐步扩大呈显著弥漫性大脂滴和脂肪变性。结论:30%高果糖饮水8周可建立与人类肝脏病理特征、血脂变化等相似的NAFLD小鼠模型,该模型可用于果糖致NAFLD的发病机制及药物治疗研究。第二部分:体外培育牛黄对果糖诱导NAFLD小鼠的保护作用及机制目的:初步评价体外培育牛黄（CBS）治疗果糖诱导NAFLD小鼠的药效,并从脂质代谢、氧化损伤和细胞凋亡的角度探究CBS缓解果糖诱导小鼠NAFLD的作用机制。方法:用30%（w/v）果糖水喂养雄性C57BL/6小鼠8周,诱导NAFLD动物模型。对小鼠分别灌胃50 mg/kg和100 mg/kg的CBS或阳性治疗药物GW4064（30mg/kg）2周。通过测量小鼠体重和肝脏重量计算肝脏指数。测定小鼠FPG及FINS含量,评价小鼠胰岛素抵抗水平。行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,评价小鼠胰岛β细胞功能和机体血糖调节能力。小鼠肝脏行HE染色以及油红O染色,观察肝脏显微结构改变并评价其脂质累积程度;检测小鼠肝组织中TG、TC、FFA等含量;测定小鼠血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C等含量,全面评价小鼠脂质代谢改变。检测小鼠肝脏组织中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等氧化损伤指标。采用Western blot检测小鼠肝脏中脂肪酸合成酶（FAS）及激素敏感性脂肪酶（HSL）表达,氧化应激相关核受体核因子E2相关因子（Nrf2）表达,以及凋亡相关蛋白NF-κB、CASPASE-3、BAX和BCL-2表达。小鼠肝脏行TUNEL染色,检测肝细胞凋亡情况。结果:CBS可以显著缓解高果糖饮水导致小鼠的体重增加,降低肝脏指数。且有效降低NAFLD小鼠血清中FPG、FINS、TG和TC水平,并增加了HDL-C水平。CBS治疗还显著抑制了肝脏中TG,TC和FFA的异常升高。从HE染色和油红O染色观察结果可见,CBS缓解了果糖所致的肝脏脂质蓄积和结构损坏。CBS能有效地降低FAS蛋白的表达,从而减少肝脏内源性脂肪生成;CBS增强肝脏中的SOD酶活性,降低ROS和MDA含量,同时降低核受体Nrf2表达。TUNEL染色显示,CBS显著降低肝细胞凋亡比例。Western blot结果显示凋亡相关蛋白NF-κB、CASPASE-3、BAX在CBS的治疗后表达显著降低。结论:CBS可通过改善代谢紊乱,增强肝脏抗氧化作用和减轻肝细胞凋亡,进而显著改善果糖诱导NAFLD小鼠肝脏脂质沉积。第三部分:CBS治疗果糖诱导NAFLD体外机制验证目的:建立果糖诱导L02肝细胞脂肪变性模型,并对该细胞模型进行评价。利用该模型与血清药理学技术研究CBS缓解肝细胞脂质积累的分子机制。方法:体外培养L02肝细胞,以不同浓度的果糖处理24 h诱导细胞脂肪变性。采用CCK-8法测定果糖对细胞活性的影响,试剂盒测定培养基中谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）含量,评价果糖对肝细胞的损伤程度。油红O染色观察细胞内脂滴的沉积情况,并测定细胞内TG含量,同时Western blot技术检测脂质代谢相关蛋白表达情况,明确果糖最佳造模浓度。利用血清药理学方法获得CBS含药小鼠血清,评价其对L02肝细胞增殖的影响。通过果糖诱导的L02细胞脂肪变性模型,以CBS含药血清和Nrf2激动剂Oltipraz干预,使用油红O染色和细胞内TG含量评价CBS含药血清通过Nrf2改善肝细胞脂质沉积的作用。采用ROS及凋亡检测试剂盒分别评价CBS含药血清对肝细胞脂质过氧化程度和凋亡的影响。采用RT-PCR技术检测脂质合成和凋亡相关基因的表达。结果:果糖浓度为4 mmol/L时,L02肝细胞内即有大量脂滴形成,且细胞内TG含量显著增加,为对照组的1.5倍。4 mmol/L果糖能显著上调Ch REBP、SREBP-1和ACC1蛋白表达。CBS含药血清对L02肝细胞增殖无显著影响。与模型组相比,CBS含药血清能有效减少果糖诱导的L02细胞脂滴形成,显著降低TG和ROS水平,显著降低肝细胞凋亡率（P<0.05）。CBS含药血清治疗组Ch REBP、SREBP-1c、FAS、ACC1、SCD1、BAX和CASPASE-3 m RNA表达水平明显低于模型组（P<0.05）。上述效应均可被Oltipraz逆转。结论:采用4 mmol/L果糖可成功诱导L02肝细胞脂肪变性,该模型适用于高果糖饮食诱导NAFLD脂质合成的体外机制研究。CBS含药血清能显著抑制果糖诱导的L02肝细脂肪沉积,其机制是CBS经Nrf2通路降低细胞内ROS水平,改善细胞内过氧化状态,从而减少细胞凋亡。第四部分:CBS对果糖诱导的小鼠肝脏胆汁酸平衡调节目的:探究CBS对NAFLD小鼠肝脏胆汁酸代谢轮廓的影响。方法:如同第二章构建NAFLD小鼠模型方法造模,造模成功后分别给予小鼠灌胃50 mg/kg和100 mg/kg CBS或阳性治疗药物GW4064（30 mg/kg）2周进行治疗。最后一天给药24 h后收集小鼠肝脏,并采用靶向代谢组学分析小鼠肝脏胆汁酸代谢轮廓。结果:NAFLD小鼠肝脏胆汁酸组成和含量相对正常小鼠发生显著改变,其中鹅去氧胆酸（CDCA）、去氧胆酸（DCA）、甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）含量升高（P<0.05）,牛磺鼠胆酸（TMCA）、牛磺石胆酸（TLCA）、牛磺去氧胆酸（TDCA）含量降低（P<0.05）。与NAFLD模型小鼠相比,CBS组肝脏中CDCA、DCA、GCDCA含量降低（P<0.05）,鼠胆酸（MCA）、TMCA、TDCA、牛磺胆酸（TCA）、和甘氨胆酸（GCA）含量升高（P<0.05）。结论:CBS能改善NAFLD小鼠胆汁酸的异常变化,这可能是CBS通过修复肝脏胆汁酸合成和转化途径,增加结合型胆汁酸含量而起到保护肝细胞的作用。