口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的动物的一种烈性传染病,该病传播速度快,宿主范围广,发病率高,主要侵害猪、牛、羊等经济价值较大的动物,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病之首。对于口蹄疫的防控,发达国家一般采用扑杀的措施来快速消灭该病,而大多数发展中国家主要采取疫苗免疫的综合防制措施来防止本病的发生。因此,建立一种诊断方法鉴别疫苗免疫动物与自然感染动物以及筛查隐性感染动物,成为FMD防制的重要工作之一。本研究采用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中分别表达口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB和3B,SDS-PAGE分析表明3ABC和3AB均得到高效表达,其大小分别为37 Ku和26 Ku,经Western blot检测证实3ABC的反应原性最好。通过电洗脱方法得到纯化的3ABC蛋白,将其作为包被抗原,初步建立了口蹄疫3ABC-ELISA鉴别诊断方法,并对试验条件进行了优化。确定抗原的最佳包被浓度为2.5μg/mL,脱脂乳封闭1h封闭效果最好,检测抗体最佳作用时间为1 h,底物最佳作用时间为15 min。敏感性试验表明,当阳性血清稀释度为1:1280时仍可检出;重复性试验表明,本方法批内重复的变异系数均小于7%,批间重复的变异系数均小于15%;交叉试验表明,本方法检测牛传染性鼻气管炎、牛流热、赤羽病、牛胸膜肺炎等血清,均不发生交叉反应,具有良好的特异性。符合性试验表明,与中国农业科学院兰州兽医研究所生产试剂盒的符合率为86.4%,与北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产试剂盒的符合率为77.3%。