极性二肽与一价金属离子间相互作用及DNA切割活性的研究

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肽类化合物是由两个氨基酸或者多个氨基酸脱水缩合得到的一类化合物。这类化合物在自然界中广泛存在。肽类化合物作为一类具有广泛生物活性的分子,在形成荷尔蒙、抗生素、抗真菌素、毒素、癌抑制剂以及离子载体系统等方面展现出了巨大作用;同时这类化合物与金属离子配合后同样也具有一定的生物活性,由于它们具有与生命息息相关的生物活性,所以肽类化合物的研究越来越引起人们的关注。本文在前人研究的基础上,利用凝胶电泳的方法考察了11种极性二肽(L-天冬氨酸二肽,L-精氨酸二肽,L-苏氨酸二肽,L-脯氨酸二肽,L-组氨酰赖氨酸二肽,L-天冬氨酰脯氨酸二肽,L-谷氨酰胺酰甘氨酸二肽,L-天冬氨酰酪氨酸二肽,L-谷氨酸二肽,L-酪氨酰精氨酸二肽,L-苏氨酸环二肽)自身及其在二价金属离子作用下,对pUC19质粒DNA的切割活性。同时,利用凝胶电泳法分别从缓冲溶液、金属离子、浓度、pH值、反应时间五个方面考察了具有较强切割活性的极性二肽在切割pUC19质粒DNA时的最佳条件。在所研究的11种极性二肽中,发现苏氨酸环二肽在没有金属离子参与的情况下,对pUC19质粒DNA也具有切割作用,其DNA的切割率达到80%以上;而其他极性二肽,只有在金属离子存在的情况下,才具有切割活性。例如苏氨酸链状二肽在Mg2+的作用下对pUC19质粒DNA具有切割作用,切割率达到80%以上;L-天冬氨酰脯氨酸二肽在Ca2+作用下对pUC19质粒DNA有切割作用;L-天冬氨酸二肽在二价金属离子Co2+、Ca2+的辅助下对DNA的切割活性也很明显;L-组氨酰赖氨酸二肽在Ca2+离子的辅助下也有很好的切割活性;L-谷氨酸二肽与Mg2+相互作用对DNA也具有少量的切割作用。对于极性二肽的切割机理,我们也做了初步的探讨,研究发现不论是否有金属离子的辅助,其切割机理均为水解机理。本文利用高效液相色谱法(HPLC),电喷雾质谱法(ESI-MS)分别测定了极性二肽与一价金属离子的结合常数,并由此判断不同的极性二肽与一价金属离子间作用力的强弱。高效液相色谱法采用的是Fujimura方法,在有三氟乙酸(TFA)存在的液相条件下,测定11种极性二肽与一价金属离子(Li+、Na+、K+、Cs+、Ag+)的结合常数,实验结果表明,在相同条件下,大部分的极性二肽与Ag+的作用要强于其他四种离子。同时利用电喷雾质谱法也测定了11种极性二肽与一价金属离子(Li+、Na+、Cs+、Ag+)的结合常数,考察了不同阴离子存在下,对极性二肽与一价金属离子间相互作用强弱的影响。发现不同侧链的极性二肽与一价金属离子的相互作用差别较大,其中L-脯氨酸二肽、L-天冬氨酰酪氨酸二肽、L-谷氨酰胺酰甘氨酸二肽和L-天冬氨酰脯氨酸二肽与一价金属离子的结合能力要大于其他极性二肽,而L-天冬氨酰酪氨酸二肽与Na+的结合常数是L-酪氨酰精氨酸二肽与Na+结合常数的4116倍。
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