目的:骨肉瘤是骨的原发恶性肿瘤,在儿童和青少年中较为多发。骨肉瘤好发部位一般位于股骨、胫骨和肱骨等,其恶性程度高且预后较差。骨肉瘤常见转移是肺部,导致较高的死亡率。近30年骨肉瘤的治疗和预后都没有发生明显改变。ONZIN又称胎盘相关蛋白8（Placenta associated 8,PLAC8）,已被证明与骨肉瘤的发生发展密切相关,但其机制尚不清楚。我们试图阐明ONZIN在骨肉瘤发展过程中的作用。本研究旨在探究ONZIN在骨肉瘤发生发展进程中作用的信号通路和相关基因。方法:通过脂质体向骨肉瘤细胞转染ONZIN过表达质粒骨,我们成功建立了稳定过表达ONZIN的骨肉瘤细胞系MG-63。提取培养细胞RNAs构建DNA文库,文库检测合格后使用llumina Hi Seq ^TM 2000平台进行转录组测序,进一步研究ONZIN调控骨肉瘤发展的机制。测序数据进行质量控制、数据比对和表达定量分析,筛选差异表达基因,并对筛选出的差异表达基因进行GO功能显著性富集分析和KEGG pathway显著性富集分析。使用western blot和qPCR检测CDK/Rb/E2F信号通路成分的在mRNA和蛋白质水平的表达情况。Western blot检测ONZIN稳转及其对照组骨肉瘤细胞系MG-63中Rb磷酸化水平。通过CCK8实验检测ONZIN稳转及其对照组骨肉瘤细胞系MG-63的细胞增殖能力。结果:原始测序数据使用FastQC进行过滤,得到Clean reads共44343754,占总Reads的98.%。质量检测合格符合进一步分析要求。使用RSEM进行基因表达定量,根据泊松分布的方法筛选ONZIN稳转及其对照组骨肉瘤细胞系MG-63中的差异表达基因。差异基因分析结果显示,根据测序数据统计出2925个显著差异基因,其中1314个基因表现为上调,另外的1611个基因表现为下调。GO功能显著性富集分析显示:差异基因在细胞组分中的细胞、细胞区域部分、细胞器显著富集;在生物过程中的细胞过程、单组织过程和代谢过程显著富集;在分子功能中的结合和催化活性显著富集。KEGG Pathway功能显著性富集分析表明,Pathways in cancer信号通路显著富集,通路注释差异基因共151个,占5.83%。Pathways in cancer信号通路图中发现CDK/Rb/E2F通路被调控并影响细胞增殖。Western blot和PCR结果显示CDK/Rb/E2F通路成员在mRNA及蛋白质水平增加。检测骨肉瘤细胞系MG-63中的Rb在ser780和ser811位点的磷酸化水平,我们发现ONZIN过表达可引起CDK介导的Rb磷酸化增加。CCK8实验结果表明,ONZIN过表达骨肉瘤细胞系MG-63与对照组相比细胞增殖能力增加。结论:本研究发现过表达ONZIN通过激活CDK/Rb/E2F通路参与骨肉瘤发生发展。我们了解ONZIN在骨肉瘤中发挥作用的分子机制,对于研究骨肉瘤发生发展起到一定的作用。ONZIN及CDK/Rb/E2F通路可能是骨肉瘤潜在的治疗靶点,未来需要对ONZIN作用机制做进一步探究,为恶性肿瘤的治疗提供新的方法。