【摘 要】
：
葡萄糖异构酶（glucose isomerase,GI）作为消耗量最大、商业化最成功的酶,目前主要采用交联法、包埋法和吸附法进行固定化。为克服传统固定化方法的工艺复杂、成本高等问题,本研究探索了一种新型自固定化技术,即将自固定化融合标签与酶基因通过连接肽连接后导入表达宿主大肠杆菌BL21,经诱导表达获得自固定化包涵体型葡萄糖异构酶。将自固定化酶与经过传统的后固定化方法制备的包涵体型葡萄糖异构酶对比
论文部分内容阅读
葡萄糖异构酶（glucose isomerase,GI）作为消耗量最大、商业化最成功的酶,目前主要采用交联法、包埋法和吸附法进行固定化。为克服传统固定化方法的工艺复杂、成本高等问题,本研究探索了一种新型自固定化技术,即将自固定化融合标签与酶基因通过连接肽连接后导入表达宿主大肠杆菌BL21,经诱导表达获得自固定化包涵体型葡萄糖异构酶。将自固定化酶与经过传统的后固定化方法制备的包涵体型葡萄糖异构酶对比,系统研究两种酶的酶学性质差异,本研究主要研究内容与结果如下:（1）以pET-30a（+）载体、自固定化标签8PD0/1/2、连接肽序列L1/2/3和经密码子优化的GI基因为基本元件,利用酶切连接法构建出3株包涵体型GI工程菌和12株自固定化包涵体型GI工程菌;经诱导表达后,利用超声辅助尿素清洗法纯化重组蛋白,以酶活为第一指标,蛋白含量为第二指标,分别从两类工程菌中各筛选出一株最优菌株:pET-L1-GI和pET-8PD1-L1-GI。（2）以酶活和蛋白含量为指标,优化包涵体型GI工程菌pET-L1-GI的培养条件,最佳参数为:诱导温度为31℃、诱导开始时间为培养5 h时,诱导持续时间为7 h,诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的终浓度为0.4 mmol/L,超声条件为诱导4 h时超声1 min,重组蛋白的酶活为37.96 U/m L酶液,产量为1723.79μg/m L酶液。（3）以酶活和蛋白含量为指标,优化自固定化包涵体型GI工程菌pET-8PD1-L1-GI诱导温度、诱导开始时间、诱导持续时间、诱导剂浓度、氨基酸种类和超声条件参数,得出结论:在培养基添加终浓度为10 mmol/L的缬氨酸的条件下,培养6 h后加入终浓度为0.6 mmol/L的IPTG,28℃诱导6 h后超声1.5 min后,继续诱导1 h,重组蛋白的酶活为12.01 U/m L酶液,产量为962.23μg/m L酶液。（4）pET-L1-GI的包涵体型GI重复使用性能不佳,利用壳聚糖-戊二醛交联法对其进行后固定并进行条件优化,结果显示:壳聚糖浓度为0.1‰、戊二醛浓度为0.25%、交联p H为8.0和交联时间为2 h时的固定化率（74.78%）和酶活回收率（87.48%）最佳。研究pET-L1-GI后固定化酶与pET-8PD1-L1-GI自固定化酶的基本酶学性质,结果表明:与传统的后固定化酶相比,自固定化酶的最适温度从75℃提高到了80℃,最适p H从10.0下降为9.0;自固定化酶的温度适用范围变小、p H适用范围更广,有更好的温度稳定性和p H稳定性;Mg2+、Co2+和Mn2+3种金属离子对两种酶活均有促进作用,其中Mg2+和Co2+的效果最显著,Ca2+、Zn2+和Ba2+对两种酶活有抑制效果,Cu2+对后固定化酶酶活有促进作用;两种酶的Km值接近表明其对底物有类似的亲和力。在实际模拟应用中,与火龙果汁为底物相比,两种酶在以麦芽糊精水解物为底物的反应中均表现出更好的活性;与后固定化酶相比,自固定化酶具有更优良的催化性能,实际相对酶活分别为后固定化酶酶活的2.1倍（以麦芽糊精水解物为底物）和3.8倍（以火龙果汁为底物）。
其他文献
近年来我国鸡肉的人均消费量逐年增高,已经成为仅次于猪肉的第二大肉类消费品。由于鸡肉营养丰富,水分含量高,极易被食源性致病菌污染,危害人们的身体健康。其中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）以及产气荚膜梭状芽孢杆菌（Clostridium perfringens）,是鸡肉中常见的三种食源性致病菌。这些致病菌污染肉品
在国际格局调整、新冠疫情以及地缘政治风险叠加的背景下，日本政府不断增强贸易政策的安全属性，推动贸易政策走向“泛安全化”。日本贸易政策的安全化转向受到外部风险冲击以及国际竞争的影响，同时也是岸田政府寻求国际影响力和国内政治支持的重要载体。贸易政策的“泛安全化”导致安全思维成为日本制定和施行贸易政策的价值取向。在经历了利益界定、威胁识别和手段选取3个阶段后，日本贸易政策的安保属性日趋凸显，压迫性色彩也
羊肉作为人们餐桌上常见的肉类之一,深受消费者青睐。近年来,羊肉消费水平稳步提升,肉羊养殖规模也在不断扩大。然而,华东地区集约化及异地育肥的养殖模式,为各类病原的传播提供了有利条件。以致病性大肠杆菌为代表的细菌性病原流行广泛、危害巨大。动物源致病性大肠杆菌中的产志贺毒素大肠杆菌（STEC）和肠道外致病性大肠杆菌（Ex PEC）是两类重要的人兽共患病原菌,具有重要的公共卫生意义。已有多项研究表明STE
＜正＞ 如大家所知道的,原子和分子能够发射和吸收光的电磁波。对于每一个原子和分子有一定的波长可以表现它们的特征。这些波长的集合称为该原子或分子的波谱。目前波谱底研究已发展成为一个独立的物理学部门,称为波谱学。大体说来波谱底研究在于测量有极大辐射或吸收时的波长,以及测量在这些波长上吸收和辐射的强度。波谱学的发展是从研究可见范围内的波谱开始的,然后才过渡到不可见的射线——红外线、紫外线以及倫琴射线（见
少年强,则国强。青少年的体质健康水平既关乎自身的未来发展,更关乎中华民族的伟大复兴。作为青少年的重要组成,小学生群体的体质健康一直广受关注、广为担忧。在当前体育强国建设、体教融合和“双减”等政策叠加导向下,深入了解和探究小学生的体育运动情况尤为重要。基于此,本研究运用文献资料、问卷调查、个案研究等研究方法,对攀枝花市米易县第一小学校24名小学生的运动形式和运动负荷情况进行了一学期追踪研究。通过建立
体育中考制度实施以来,受到社会各界的高度关注和重视,体育中考分值的不断增加,成都市从30分到60分,牵动着学生和家长的心。本文运用了文献资料法、问卷调查法、实地考察法、数理统计法等研究方法对2021年成都市锦江区体育中考实施的具体情况,可能存在的弊端进行分析和研究,为体育中考实施更加完善提出建议和对策,为体育中考改革提出参考建议。研究发现:1、成都市锦江区体育中考分值、体育中考分值占中考总分的比例
乳酸链球菌素（Nisin）是一种天然、安全、高效的食品防腐剂,可抑制大部分革兰氏阳性菌的生长繁殖,已被广泛应用于食品中。但其存在抗菌稳定性差、抗菌谱窄的缺点,严重影响了在实际应用中的抗菌保鲜效果。通过复合凝聚反应进行Nisin的微胶囊处理是解决上述难题的重要策略之一。因此,本文以Nisin和阴离子表面活性剂鼠李糖脂（RL）为研究对象,通过复合凝聚反应构建不同条件下Nisin/RL复合凝聚体系的相图
制造业企业所处的市场环境越来越复杂，企业的经营方式也随着时代的发展发生了变化，制造业企业财务风险发生概率上升。基于此，文章分析了制造业企业财务风险防控现状和制造业企业可能出现的财务风险的具体原因。针对上述问题，提出了企业财务风险防控措施。
2020年4月27日,中央全面深化改革委员会第十三次会议审议通过的《关于深化体教融合促进青少年健康发展的意见》中指出,要树立“健康第一”的教育理念,深化体教融合,促进青少年健康发展,帮助学生在体育锻炼中“享受乐趣、增强体质、健全人格、锻炼意志”,培养德智体美劳全面发展的社会主义建设者和接班人。“体教融合”在本质上就是未来培养体育后备人才的一种新型发展模式,为我国竞技体育的发展带来了生机与活力,对体
随着国家对青少年教育的重视,家长对孩子教育观念的转变,我国营地教育初现“井喷”式发展。同时,由于户外体育营地发展速度过快,其质量也参差不齐,尤其是户外体育营地在课程设置上还未形成比较完善的体系,很难符合青少年发展需求,因此,如何构建一个科学合理且具有针对性的户外体育营地课程体系是目前需思考的问题。本研究主要以小学户外体育营地课程评价指标为研究对象,以CIPP评价模型为理论指导,结合我国政策和国内外