第一节:人脐带间充质干细胞治疗胶原酶Ⅳ引起的出血性脑卒中目的初步探索间充质干细胞对胶原酶Ⅳ引起的脑基底节出血的治疗效果以及潜在机制。方法使用流式细胞术和诱导培养的方式,鉴定间充质干细胞是否符合国际制定标准;经过尾静脉注射人脐带间充质干细胞到各组不同的大鼠中,通过H&E组织化学染色以及Neu N、GFAP、iba1、TUNEL以及KI67等免疫组化,来评价人脐带间充质干细胞对脑出血大鼠的脑血肿程度、神经细胞丢失程度、神经炎症反应的激活以及神经细胞的凋亡与增殖。结果相较于模型组,在接受间充质干细胞干预后的脑出血大鼠在在脑血肿程度、神经细胞丢失程度以及神经炎症反应的激活等方面均有显著的好转,但在神经细胞的凋亡与增殖方面无显著变化。结论1.分离的hUC-MSCs,符合国际干细胞协会制定的标准,可以用作实验研究。2.在Ⅳ型胶原酶诱导的SD大鼠出血性脑卒中模型中,局部注射hUC-MSCs于病灶部位、尾静脉输注hUC-MSCs这两种治疗方式均能显著改善脑出血的血肿体积,起到对脑出血后神经细胞的保护作用。hUC-MSCs能抑制星状胶质细胞的活化、抑制小胶质细胞增生,起到抑制炎症细胞浸润来调控炎症反应的作用,缓解由炎症反应进一步加重的出血性脑卒中继发性损伤。Ⅳ胶原酶诱导的脑出血在造模5天时,神经细胞凋亡、增殖不活跃,此时期可能不是hUC-MSCs发挥对ICH大鼠神经保护作用的主要途径。第二节:骨髓间充质干细胞治疗磁性纳米微粒造成急性缺血性脑卒中目的稳定建立磁性纳米微粒造成小鼠急性期缺血性脑卒中模型;并探索间充质干细胞对其治疗效果。方法通过将磁铁固定于小鼠脑壳上,尾静脉注射磁珠。通过磁铁的放置与移去,建立能够精准控制栓塞部位、梗塞灶的大小以及缺血持续时间,并能可逆性开放血管形成再灌注的小鼠缺血性脑卒中模型,并通过Neu N、GFAP、Iba-1、CD31、Fibrinogen等免疫荧光染色判断模型的建立效果。成功建模的小鼠通过鼻腔吸入间充质干细胞,分离鼠脑袋,进行Neu N免疫荧光,评价间充质干细胞的治疗效果。结果通过Neu N、GFAP、Iba-1、CD31、Fibrinogen等免疫荧光染色可以判断,建立的磁性纳米微粒造成小鼠急性期缺血性脑卒中具有明显的脑梗死的特征,可以一定程度上代表临床上脑梗死的模型;通过鼻腔吸入间充质干细胞,可以一定程度上减少梗死灶的面积,具备一定的治疗效果。结论1.磁控纳米粒子诱导的缺血性脑卒中能精准控制缺血时间、梗死灶大小。缺血2小时再灌注6天导致的急性脑梗死模型具有典型的神经元丢失、星状胶质细胞活化以及小胶质细胞聚集于损伤病灶活化的特点,与传统MCAO模型特点相似,可以模拟临床脑中动脉破裂造成的脑梗死。2.BM-MSCs经磁控纳米粒子诱导的缺血性脑卒中模型小鼠鼻腔吸入,能显著减小模型动物脑梗死灶,病灶部位神经元丢失的情况得到明显改善,减轻脑组织缺血再灌注引起的损伤。全文结论间充质干细胞对由脑出血和急性脑梗死引起的脑卒中均有较好的抑制效果,并且可以显著改善由脑卒中引起的神经细胞丢失,但其进一步的治疗机制有待于深入探索。