【摘 要】
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本研究利用实验室筛选保存的一株产灵菌红素(prodigiosin,PG)的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)RZ21,采用物理与化学相结合的复合诱变方法对菌株进行了诱变,从中获得灵菌
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本研究利用实验室筛选保存的一株产灵菌红素(prodigiosin,PG)的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)RZ21,采用物理与化学相结合的复合诱变方法对菌株进行了诱变,从中获得灵菌红素产量提高的RZ21-a菌株。在诱变筛选的基础上,对新获得的RZ21-a菌株的培养基成分和发酵条件进行了优化,并对超临界C02流体萃取技术提取RZ21-a菌株产生的灵菌红素的工艺进行了研究。使用紫外线-LiCl和微波-硫酸二乙酯(DES)复合诱变的方法对出发菌株RZ21进行诱变,结果显示:通过这两种诱变方法得到的突变菌株灵菌红素产量都有所提高,经紫外线-LiCl诱变处理筛选出的RZ21-a菌株的灵菌红素产量相对较高,其产量达到了 35.38 mg/L,较出发菌株提高了 20%;微波-DES诱变得到的RZ21-b菌株灵菌红素产量达到31.28 mg/L,较出发菌株提高了 6%,紫外线-LiCl诱变的效果明显优于微波-DES诱变效果。对紫外线-LiCl诱变获得的RZ21-a菌株进行了培养基成分和发酵条件优化,得出最佳培养基成分:蔗糖25g/L,蛋白胨25g/L。最佳发酵条件:30mL/250mL装液量,pH6.0,温度28℃,转速153rpm,接种量4%,黑暗条件下培养48h。灵菌红素产量最高可达1219.03 mg/L。将获得的发酵液经过离心、烘干等处理,然后采用超临界CO2流体萃取的方法来提取灵菌红素。通过研究萃取温度、萃取时间、添加夹带剂的种类以及固体颗粒的目数对萃取效果的影响,确定最佳萃取条件为萃取温度45℃,萃取时间2.5h,30%甲醇作为夹带剂,固体菌体粒度20-40目。将萃取得到的产物经全波长扫描和质谱分析,鉴定为灵菌红素,经HPLC检验相对纯度可达98.26%。
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