论文部分内容阅读
本研究利用神经母瘤细胞(SH-SY5Y)为体外试验模型,选取山核桃(Carya cathayensis Sarg.)为试验材料,从新鲜山核桃仁中分别提取脂溶性与水溶性成分处理SH-SY5Y细胞,测量细胞突触长度及检测神经营养相关基因表达,探讨山核桃神经营养活性及其分子生物学机制。同时应用HPLC及HPLC-MS检测分析山核桃脂溶性与水溶性成分,分离鉴定山核桃神经营养活性因子。主要结果如下:(1)山核桃脂溶性成分与水溶性成分处理SH-SY5Y细胞,细胞突触长度与相关基因NF160、NPY、NGF表达检测结果表明山核桃脂溶性成分与水溶性成分在一定浓度范围内能够显著促进细胞突触生长,由此说明山核桃脂溶性成分与水溶性成分都具神经营养活性。进一步研究发现山核桃脂溶性成分能够显著诱导细胞NF160、NPY、NGF表达,山核桃水溶性成分能够显著诱导细胞NF160表达,说明山核桃通过调控NF160、NPY、NGF的表达调控神经营养活性。(2)山核桃脂溶性成分HPLC及HPLC-MS检测结果显示山核桃脂溶性成分较对照具三个特异性色谱峰,分子量依次为278、280、282,通过分子量比对及相关标准品验证后确定三个特征峰依次为亚麻酸(LNA)、亚油酸(LA)、油酸(OA)。将三种脂肪酸标准品按山核桃脂溶性成分对应比例浓度混合后处理细胞,试验结果与山核桃脂溶性成分处理细胞结果相一致,由此确定山核桃脂溶性主要成分神经营养活性因子为以上脂肪酸中的一种或几种。(3)以上三种脂肪酸按山核桃脂溶性成分在自然状态下对应比例混合,不同浓度梯度处理细胞,结果显示总浓度3.3μmol/L时活性最好,按此浓度进行单一及改变脂肪酸比例分别处理细胞,结果表明三种脂肪酸比例为1∶8∶16(亚麻酸∶亚油酸∶油酸)神经营养活性最好,混合后活性优于单独脂肪酸神经营养活性。由此确定山核桃脂溶性主要成分神经营养活性因子为按一定比例混合后的亚麻酸、亚油酸、油酸。(4)山核桃水溶性成分HPLC、HPLC-MS检测及标准品比对结果显示其中含有胞苷、尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷等几种物质。以上确定成分按山核桃水溶性成分相同条件处理细胞,结果表明这五种物质不具神经营养活性,在山核桃水溶性成分活性因子确定中可排除。