【摘 要】
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目的:(1)培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探索、完善分离、提取及鉴定骨髓间充质干细胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal
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目的:(1)培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探索、完善分离、提取及鉴定骨髓间充质干细胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles,BMSCs-MVs)的系统方法;(2)通过BMSCs-MVs与新西兰大白兔膝关节软骨细胞共培养,探讨BMSCs-MVs对软骨细胞增殖活性的影响;(3)通过BMSCs-MVs与软骨细胞共培养,探讨BMSCs-MVs对软骨细胞的基质合成活性的影响。方法:(1)2月龄新西兰大白兔BMSCs的分离、培养和鉴定;(2)BMSCs-MVs的分离和鉴定;(3)3月龄新西兰大白兔软骨细胞的获取;(4)将BMSCs-MVs加入第三代软骨细胞中共培养,利用CCK-8、Ed U细胞增殖试剂检测共培养对软骨细胞增殖活性;利用RT-PCR技术研究共培养对软骨细胞基质分子合成活性的研究;结果:(1)CCK-8、EdU法检测BMSCs-MVs对软骨细胞增殖的影响,发现BMSCs-MVs能促进软骨细胞的增殖(P<0.01),且随BMSCs-MVs剂量增加而增加(P<0.01);(2)RT-PCR分析发现,BMSCs-MVs与软骨细胞共培养后,软骨细胞的Agg、Ⅱ型胶原的表达量增加,而Ⅹ型胶原、MMP-13、TIMP-1的表达量下降。结论:(1)BMSCs-MVs能够促进软骨细胞的增殖;(2)BMSCs-MVs能够抑制Ⅹ型胶原和MMP-13的合成,同时促进软骨细胞合成Agg、Ⅱ型胶原,或许具有保护软骨基质、抑制软骨损害的作用。
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