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肺炎支原体(Mycoplasma Pneumonia,MP)是一种介于细菌和病毒之间,且能在无生命培养基中生长的最小微生物,其引起的肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)占小儿肺炎发病率的 20%以上,且呈逐年递增的趋势,因此筛选治疗MPP的中药已成为一个重要的课题。芩百清肺浓缩丸(以下简称“芩百”)是经国家审批的第一个治疗小儿肺炎支原体肿炎的中药新药,课题组对芩百中药味进行体外抗MP活性研究发现,桔梗提取物具有较强的抗MP作用。因此,本课题研究旨在明确桔梗抗MP的有效部位及成分,并通过考察其对MP感染大鼠肺组织中转化生长因子-β(transfo-rming growth factorβ,TGF-β)及肺表面活性蛋白A(surfactant-associated protein A,SP-A)的影响,探讨其对 MP 感染大鼠 肺泡 Ⅱ 型上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cell,AEC-Ⅱ)损伤的修复机制。目前,有关桔梗的生物活性报道很多,但其对抗MP感染的治疗作用及有效部位和成分的研究尚属空白,目从AEC-Ⅱ入手,研究中药对MP感染导致肺损伤的修复机制尚未见报道。本研究首先采用大孔吸附树脂柱,以不同浓度乙醇对桔梗乙醇提取物进行洗脱,各洗脱流份分别在体外测定最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),初步确定其抗MP有效部位,对该有效部位进行定性、定量以及杀菌时效曲线(KILL-TIME)的测定,再将该有效部位进行体内实验,观察其病理组织学变化。结果,50%乙醇冼脱物具有抗MP作用,经检测,该部位中主要含有皂苷类成分,且总皂苷含量在70%以上,桔梗皂苷 D(PlatycodinD,PD)含量为 68.14mg·g-1,桔梗总皂苷(Platycodon grandiflorum saponin,PGS)及桔梗皂苷D体外抗MP的MIC值分别为32-64μg·mL-1 和 16-32 μg·mL-1,最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)分别为 64-128μg·mL-1 和 32-64μg·mL-1,且在7天的培养时间 里可以完全抑制MP繁殖。病理学检查病变主要在肺内,病理表现为间质性肺炎,PGS及PD各剂量组与模型组相比,上述炎症明显减轻。采用滴鼻法复制MPP模型,给药十天后,通过HE染色观察各组肺组织病理学变化,并进行病理组织评分;采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及血清中SP-A含量;实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)测定肺组织中 TGF-β及 SP-AmRNA 的表达;免疫印迹法(WB)检测肺组织中TGF-β、SP-A的蛋白表达;免疫组化法(IHC)检测TGF-β、SP-A在肺组织中的分布、定位及表达。结果,通过病理组织评分可知,桔梗总皂苷及桔梗皂苷D对MPP大鼠肿组织炎症的改善与剂量呈明显的量效关系,且中、高剂量均具有显著差异;各给药组血清中SP-A含量降低,而BALF中SP-A含量增加;肺组织中TGF-βmRNA及蛋白表达下调,SP-A mRNA及蛋白表达增加,其中TGF-β为胞浆型表达的细胞因子,主要分布在肺间质及肺泡壁,SP-A主要分布在AEC-Ⅱ及部分肺泡巨噬细胞内。通过上述研究,确定了桔梗抗MP有效部位为桔梗总皂苷,其中桔梗皂苷D是其活性成分之一;对MP感染引起的肺组织损伤具有修复作用,其作用机制可能通过下调肿组织中TGF-β的表达,抑制AEC-Ⅱ发生上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT),并增加 SP-A 的表达,恢复AEC-Ⅱ的正常生理功能。该课题研究,为筛选具有抗MP作用的中中药及明确其作用机制提供思路与方法,同时对扩大桔梗的用药范围及合理应用具有重要的参考价值。