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目的:2型糖尿病（Type 2 diabetes,T2D）的重要病理特征之一为交感神经过度兴奋,这种持续性的过度兴奋进一步恶化T2D,目前引起T2D大鼠下丘脑室旁核（Paraventricular nucleus,PVN）内交感亢进机制尚不明确。本研究拟探讨T2D大鼠PVN内微小核苷酸-9-5p（MiRNA-9-5p,miR-9-5p）及小电导钙激活钾通道(Small-conductance calcium Ca2+-activated K+channel,SK)对交感神经活动的影响及其内在机制,阐明SK3信号通路介导了PVN内miR-9-5p水平改变对交感神经活动的影响。方法:本研究选用高脂饲料（High fat diet,HFD）联合30 mg/kg链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）诱导T2D大鼠模型（Diabetes mellitus,DM）,普通饲料喂养的健康SD大鼠作为DM对照组（Diabetes mellitus control,DC）;比较平行饲养12周后DC组和DM组对糖耐量实验的反应并观察肾交感神经放电（Renal sympathetic nerve discharge,RSND）、血浆去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）、平均动脉压（Mean arterial pressure,MAP）、心率（Heart rate,HR）和空腹血糖指标的变化;酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定两组大鼠胰岛素、瘦素及甘油三酯水平;Real-time PCR测定两组大鼠PVN内SK3蛋白的编码基因KCNN3mRNA及miR-9-5p水平;Western blot检测并比较DC和DM大鼠PVN及视上核（Supraoptic nucleus,SON）内SK3蛋白表达量;分别对两组大鼠PVN微量注射人工脑脊液及miR-9-5p的重组腺相关病毒（Recombinate adeno-associated virus,rAAV）（rAAV-miR-9-5p）和/或anti-9-5p重组腺相关病毒（rAAV-anti-9-5p）,获取大鼠血糖和交感驱动指标并进行对比;免疫荧光法检测各组PVN内Fos B及SK3阳性细胞数量;分别对两组大鼠PVN微量注射人工脑脊液及KCNN3重组腺相关病毒（rAAV-KCNN3）和/或siKCNN3重组腺相关病毒（rAAV-siKCNN3）,获取并比对大鼠血糖和交感驱动指标;免疫荧光法检测各组PVN内Fos B及SK3阳性细胞数量;应用miR-9-5p和/或anti-9-5p及KCNN3和/或siKCNN3分别转染原代脑神经细胞和NG108细胞,检测干预后细胞内SK3蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验检测miR-9-5p与KCNN3的靶向关系。结果:1.与DC大鼠相比,DM大鼠室旁核内miR-9-5p基因表达显著上调（2.22±0.11比1.00±0.00,P<0.05）,KCNN3 mRNA表达无明显差异（1.04±0.05比1.00±0.00,P=0.44）,而SK3蛋白表达水平显著下调（0.61±0.05比1.00±0.00,P<0.05）。2.PVN过表达miR-9-5p导致DC和DM大鼠RSND[DC:（40.67±2.29比60.00±2.67）%of max,DM:（68.33±2.64比91.17±1.66）%of max,P<0.05]、血浆NE[DC（232.83±8.41比325.83±12.04）pg/mL,DM（372.83±13.99比489.83±18.02）pg/mL,P<0.05]、血糖水平[DC（4.85±0.33比8.53±0.52）mM,DM（13.27±0.37比18.67±0.56）mM,P<0.05]及Fos B阳性神经元数量[DC（4.50±0.56比8.33±0.61个/4×104μm2）,DM（8.00±0.58比13.83±0.60个/4×104μm2）,P<0.05]明显升高;相反,室旁核敲减miR-9-5p则可导致DC和DM大鼠RSND[DC:40.67±2.29比（29.33±1.02）%of max,DM:（68.33±2.64）比（51.17±2.50）%of max,P<0.05]、血浆NE[DC（232.83±8.41比171.17±10.54）pg/mL,DM（372.83±13.99比283.67±9.19）pg/mL,P<0.05]、血糖水平[DC（4.85±0.33比2.88±0.518）mM,DM（13.27±0.37比8.58±0.56）mM,P<0.05]及Fos B阳性神经元数量[DC（4.50±0.56比2.17±0.31个/4×104μm2）,DM（8.00±0.58比4.17±0.31个/4×104μm2）,P<0.05]显著降低。3.PVN过表达KCNN3导致DC和DM大鼠RSND[DC（40.00±1.71比30.00±1.41）%of max,DM（65.83±2.98比47.50±2.93）%of max,P<0.05]、血浆NE[DC（232.67±6.38比187.00±6.51）pg/mL,DM（346.00±11.43比257.50±6.60）pg/mL,P<0.05]及血糖水平[DC（5.28±0.32比2.98±0.19）mM,DM（12.88±0.54比8.38±0.68）mM,P<0.05]显著下降;相反,室旁核内敲减KCNN3可引起RSND[DC（40.00±1.71比59.83±2.57）%of max,DM（65.83±2.98比87.50±2.47）%of max,P<0.05]、血浆NE[DC（232.67±6.38比328.00±14.79）pg/mL,DM（346.00±11.43比461.17±13.22）pg/mL,P<0.05]及血糖水平[DC（5.28±0.32比9.23±0.60）mM,DM（12.88±0.54比18.72±0.84）mM,P<0.05]显著升高。4.室旁核内过表达miR-9-5p导致DC和DM大鼠SK3阳性神经元数量显著下调[DC（11.50±0.67比7.33±0.56个/4×104μm2）,DM（7.17±0.48比2.67±0.42个/4×104μm2）,P<0.05]。细胞转染miR-9-5p可显著下调原代脑神经细胞（1.00±0.00比0.50±0.03,P<0.05）和NG108细胞（1.00±0.00比0.53±0.04,P<0.05）内SK3蛋白水平;转染anti-9-5p则可明显上调原代脑神经细胞（1.00±0.00比0.97±0.04,P<0.05）和NG108细胞（1.00±0.00比0.94±0.05,P<0.05）内SK3蛋白水平。Targetscan预测发现miR-9-5p和KCNN3 mRNA的3’非翻译区（3’UTR）存在序列结合,双荧光素酶报告基因证实miR-9-5p靶向调控KCNN3基因（100.00±0.00比49.58±3.42,P<0.05）。结论:T2D大鼠PVN内上调的miR-9-5p可能通过靶向抑制SK3蛋白表达介导交感神经兴奋亢进。