体细胞克隆在多种家畜和实验动物上的成功,向世人证明已分化的、甚至分化终端的细胞具有发育成整个生物体的所有遗传信息,并且能够重编程和维持正常的时空表达。体细胞克隆不仅在发育生物学、基因调控、核-质互作等基础方面具有重要的理论研究价值,而且在生物医药、家畜繁育等应用方面具有巨大的商业潜力。然而,体细胞克隆的成功率太低,并且后代缺陷率高。造成体细胞克隆低妊娠率、低出生率及高的出生异常率的原因是多方面的,除克隆程序和胚胎体外培养体系外,一般认为供体细胞核未能被完全重新程序化是最重要的因素。对于早期克隆胚胎基因重编程的机理、影响因素以及其超微形态是否正常,还知之甚少。本试验测定了波尔山羊体内受精早期胚胎的端粒酶活性水平的变化,为今后山羊体细胞克隆该方面的研究提供必要的参考;观察了波尔山羊体内受精、波尔山羊耳皮肤成纤维细胞克隆、牛-山羊异种克隆三者的早期胚胎超微结构,从亚细胞水平对两种克隆胚胎进行了评定。本试验利用端粒重复序列扩增法(TRAP)测定了波尔山羊卵母细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚胚胎的端粒酶活性。结果表明波尔山羊卵母细胞和早期胚胎都是端粒酶阳性;依据电泳条带在凝胶成像系统下的光密度计算相对总产品产量(TPG)定量比较发现,卵母细胞最低为25.348,4-细胞为273.832,至8-细胞又降低到56.117,随后快速升高,桑椹胚为251.111,囊胚端粒酶活性最高为519.46。本试验说明波尔山羊卵母细胞和早期发育过程中,端粒酶具有如下变化趋势:卵母细胞很低的端粒酶活性在受精时会升高,随后有逐渐降低到8-细胞阶段的最低点,之后由于胚胎基因组的激活又逐渐升高,至囊胚达到最高水平。通过电子显微镜观察了波尔山羊体内受精(gIVE, Goat In Vivo Embryos)、波尔山羊体细胞克隆(gSCE, Goat Somatic Cloned Embryos)和牛-山羊异种体细胞克隆(b-gSCM, Bovine-goat Somatic Cloned Embryos)早期胚胎的超微结构观察。结果表明:gSCE 4-细胞阶段的核仁已发育为成熟的网状化核仁,形态不规则,含有大量的颗粒成分。因此,从核仁形态来说,gSCE在4-细胞前能够正常的发育,这也进一步说明,卵母细胞能够对同种已分化的体细胞核重定型,并支持重构胚向前发育。b-gSCM桑椹胚时核仁仍为致密的圆形核仁,由于牛和gIVE桑椹胚应该是完全网状化的核仁,说明b-gSCM细胞核可能没有被完全重定型。gSCE线粒体遵循由嵴少、电子密度高的帽状线粒体向嵴多、基质浅的、具有代谢活性的出生线粒体转变的发育规律。从线粒体形态来看,gSCE能够正常的发育。然而,定量分析的结果表明gSCE所含成熟线粒体数和线粒体总含量显著少于gIVE(P<0.05)。说明gSCE线粒体基因组与核基因组未能发生有效的相互作用。本