【摘 要】
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目的虽然之前有报道电针刺激可以改善肠道动力,调节肠道菌群,但是相关研究并不多,而且电针刺激、肠道菌群及肠道动力之间的关系阐述不明。我们的研究构建洛哌丁胺诱导的便秘小鼠模型,观察电针刺激对便秘小鼠的肠道动力和肠道菌群的组成、丰度及多样性的影响;并通过构建洛哌丁胺诱导的便秘无菌小鼠移植（FMT）模型,观察通过电针刺激处理后的小鼠粪便对便秘小鼠的肠道动力的影响,从而来验证电针是否通过调节肠道菌群从而改变
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目的虽然之前有报道电针刺激可以改善肠道动力,调节肠道菌群,但是相关研究并不多,而且电针刺激、肠道菌群及肠道动力之间的关系阐述不明。我们的研究构建洛哌丁胺诱导的便秘小鼠模型,观察电针刺激对便秘小鼠的肠道动力和肠道菌群的组成、丰度及多样性的影响;并通过构建洛哌丁胺诱导的便秘无菌小鼠移植（FMT）模型,观察通过电针刺激处理后的小鼠粪便对便秘小鼠的肠道动力的影响,从而来验证电针是否通过调节肠道菌群从而改变肠道的运动。同时我们将研究电针刺激通过调节肠道菌群改变便秘小鼠肠道动力的机制。方法6-8周的C57BL/6（雄性）小鼠经洛哌丁胺4mg/kg腹腔注射,诱导为便秘小鼠模型,正常对照组腹腔注射生理盐水,随机分为五组:正常组、便秘组（Lop组）、便秘假性刺激组（Lop+SEA组）、便秘低频电针刺激组（Lop+LEA组）、便秘高频电针刺激组（Lop+HEA组）。洛哌丁胺注射及电针刺激同步进行,持续3周后,收集各小组小鼠粪便检测粪便含水量,16s r DNA扩增子测序技术检测小鼠肠道菌群,进行钢珠排出实验、全胃肠传输实验、胃小肠传输实验;构建便秘无菌小鼠粪菌移植模型,随机分为5组,即抗生素+便秘+正常小鼠粪便移植组（FMT+Control）,抗生素+便秘+便秘小鼠粪便移植组（FMT+Lop）,抗生素+便秘+假性电针刺激小鼠粪便移植组（FMT+SEA）,抗生素+便秘+低频电针刺激小鼠粪便移植组（FMT+LEA）,抗生素+便秘+高频电针刺激小鼠粪便移植组（FMT+HEA）。3周后检测粪便含水量,进行钢珠排出实验、全胃肠传输实验、小肠转运率实验。应用超高效气相色谱质谱联用技术（GC-MS）靶向检测各组小鼠粪便中7种短链脂肪酸的含量。LC-MS靶向代谢组学技术检测小鼠粪便中的胆汁酸。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中的TDC和5-HT。Western blot检测小鼠结肠中GPR41、TGR5、TPH1;q RT-PCR检测各组小鼠结肠组织中的GPR41,TGR5,TPH1、5-HT3R,5-HT4R,c-Kit的m RNA表达。免疫荧光技术（c-Kit与Ano1共染）检测小鼠肠道肌层的ICC的表达水平与分布范围。结果（1）与便秘小鼠相比,低频刺激组小鼠粪便含水量增加,钢珠排出时间、全胃肠传输时间以及小肠转运率均缩短。（2）Shannon指数在便秘小鼠明显减少,电针刺激后增加。NMDS表明,正常组与便秘组之间存在差异,而低频刺激组显示微生物群向正常组靠近。在门水平,低频刺激后拟杆菌及变形菌减少而厚壁菌增加。在属水平,低频刺激减少no-rank Muribaculaceae和Parasutterella含量,增加乳酸杆菌含量。（3）经粪菌移植后,与FMT+Lop组相比,FMT+LEA粪便含水量增加,钢珠排出时间、全胃肠传输时间以及胃小肠传输时间均减少。（4）相较于对照组,便秘组小鼠粪便中的乙酸和丙酸含量降低,部分次级胆汁酸含量也降低,但是低频电针刺激可增加其含量。（5）便秘小鼠中GPR41、TPH1、TGR5、TDC、5-HT及其受体5-HT3R,5-HT4R表达减少,低频电针刺激及经低频刺激粪便移植后可上调其表达。且经粪菌移植后,与FMT+Lop组相比,FMT+LEA也能上调其表达。（6）经低频刺激组小鼠较便秘组小鼠肠道肌层的c-Kit与Ano1共染ICC表达增多,同时经粪菌移植后,FMT+LEA组也较FMT+Lop组小鼠肠道肌层的c-Kit与Ano1共染ICC表达增多。结论低频电针刺激可以通过调节肠道菌群来改善便秘小鼠肠道动力。低频电针刺激可以通过增加部分短链脂肪酸及胆汁酸的含量,上调GPR41-TPH1及TGR5-TDC的表达从而增加5-HT的含量,进而增加ICC的数量。
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