海蜇糖蛋白及其糖肽免疫活性研究

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海蜇(Rhopilema esculehtum Kishinouye)具有较高的经济、营养和药用价值,是一种医食同源性海洋生物。糖蛋白及糖肽作为广泛存在于生物体内的天然活性物质,除具有细胞间识别调控作用外,还有抗肿瘤、提高免疫力等多种生物活性。本课题着重对海蜇糖蛋白及其糖肽免疫活性方面进行研究,以期为海蜇资源的深度利用提供一定理论依据,为免疫型新特药物及功能食品的开发提供一定的参考。研究内容及结果如下:1.海蜇糖蛋白提取纯化:通过稀盐溶液提取、乙醇分级沉淀、膜层析等提取纯化方法,获得组分均一的糖蛋白。结果显示,糖蛋白的得率为1.8%,其中总蛋白含量为87.74%,总糖含量为11.87%。2.糖肽制备工艺优化:通过单因素试验及响应面优化试验,研究底物浓度、温度、pH值对酶解过程中水解度的影响,确定酶解海蜇糖蛋白制备糖肽的最佳工艺。结果显示,综合单因素试验和响应面优化试验确定酶解海蜇糖蛋白制备糖肽的最佳工艺参数为:以复合蛋白酶作为制备糖肽的优良酶源,底物浓度2.18mg/mL、pH7.3、温度52℃,此时的水解度为28%。3.糖蛋白及其糖肽体外免疫活性的影响:通过小鼠脾淋巴细胞增殖和转化试验,比较海蜇糖蛋白及其糖肽在不同培养时间、浓度条件下对小鼠体外免疫活性的影响。结果显示,不同培养时间、浓度的海蜇糖蛋白及糖肽均能不同程度的提高小鼠脾淋巴细胞的增殖和转化能力,且表现出一定的剂量关系。糖肽Ⅰ组在提高小鼠脾淋巴细胞的增殖和转化能力方面显著优于其它几个组分。4.糖蛋白及其糖肽体内免疫活性的影响:通过小鼠免疫器官指数试验、小鼠迟发型变态反应试验、小鼠巨噬细胞吞噬能力试验、小鼠血清溶血素试验和小鼠抗体生成细胞数试验,观察海蜇糖蛋白及其糖肽对小鼠体内免疫功能的影响。结果显示,不同浓度的海蜇糖蛋白及其糖肽均能不同程度地提高小鼠免疫活性,且表现出一定的剂量效应关系。与海蜇糖蛋白相比海蜇糖肽对免疫低下小鼠具有较强的免疫调节作用,且糖肽Ⅰ组对小鼠特异性免疫调节作用明显优于其它组分,从而筛选出免疫活性最强组分为分子量3.5KDa以下的糖肽组。
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