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本实验从国家农业部允许作为饲料微生物添加剂的菌种中选取五种益生菌——德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei subspp.Casei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)及屎肠球菌(Enterococcus faecium),从中提取基因组DNA,以新城疫为模型研究益生菌DNA协同疫苗的免疫增强作用。
五种菌种扩大培养后收集菌体,用酚抽提法提取并纯化基因组DNA,测定其含量与纯度,选择OD260/OD280>1.8的样品保存备用。用此DNA在体外刺激黄鸡外周血单个核细胞(PBMC),以MTT法测定五种细菌DNA在梯度浓度下刺激细胞增殖的效果,以EIJSA法测定1NF-γ和IL-6的分泌,从而筛选出具有较好的免疫刺激作用的细菌DNA。结果显示五种益生菌DNA对鸡。PBMC均有不同程度的刺激效果,其中枯草芽孢杆菌DNA的刺激增殖效应最好;在促进细胞分泌功能上,五种菌DNA在低浓度下均能够刺激黄鸡PBMC分泌较高水平的INF-γ,与阴性对照组相比差异显著(P<0.05);同样在低浓度下,有四种细菌的基因组DNA能够促进黄鸡PBMC分泌IL-6,与对照组相比差异显著(P<0.05)。
在上述试验基础上,选取枯草芽孢杆菌DNA作为佐剂,联合新城疫LaSota 活疫苗,免疫健康黄鸡,同时设单独新城疫抗原组、新城疫油苗组及空白对照组。15日龄与29日龄时分别进行首免和二免。首免后,每周进行HI抗体效价检测试验、外周血T淋巴细胞转化试验、血清IFN-γ检测试验,每两周进行免疫器官指数测定,研究枯草芽孢杆菌DNA的免疫增强作用。结果表明:(1)枯草芽孢杆菌DNA作为疫苗佐剂能较快速地提高m抗体水平,提示其在紧急免疫时具有更好的保护效果,也说明枯草芽孢杆菌DNA能促进黄鸡体液免疫功能;(2)枯草芽孢杆菌DNA对黄鸡外周血T淋巴细胞转化有显著的增殖效应,并促进:IFN-γ的分泌,说明枯草芽孢杆菌DNA能较好地促进黄鸡的细胞免疫功能。(3)枯草芽孢杆菌DNA作为佐剂对于三种免疫器官的影响主要体现在早期(28d),说明枯草芽孢杆菌DNA作为佐剂主要促进幼鸡免疫器官的发育,提高幼鸡的整体免疫水平。