Flavopiridol联合顺铂对人U2骨肉瘤细胞的生长抑制作用

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目的:探讨小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶Flavopiridol(FP)和顺铂(DDP)单独以及联合应用对人U2骨肉瘤细胞的生长抑制作用,为Flavopiridol作为骨肉瘤化疗辅助药物的应用提供理论基础。方法:在体外培养人U2骨肉瘤细胞(U2-OS)。将细胞分为4组:(1)空白对照组, (2)FP组:单纯用FP处理培养细胞,(3)DDP组:单纯加入血浆平均峰值浓度顺铂处理培养细胞。(4)联合用药组(FP+DDP):加入血浆平均峰值浓度顺铂和Flavopiridol处理共同培养。采用MTT法检测Flavopiridol单独和联合顺铂后对人U2骨肉瘤细胞增殖的影响,并计算Flavopiridol对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50值。流式细胞仪分析用药后对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:Flavopiridol对人U2骨肉瘤细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。不同浓度的Flavopiridol (1)空白对照组(无药物组);(2)50nmol/L FP组;(3)100nmol/L FP组;(4)200 nmol/L FP组;(5)400 nmol/L FP组;(6)1000 nmol/L FP组作用人U2骨肉瘤细胞24小时,各组细胞均表现出一定的抑制作用,分别为9.18±1.56%,19.55±±1.23%,23.25±±1.85%,27.22±±0.59%,33.15±1.99%,抑制率均不高,差异不明显。继续培养至48小时,各组抑制率分别为20.59±±3.15%,31.39±3.52%,41.41±±1.41%,52.21±±2.69%,68.86±±1.20%,各组间有明显组间差异(P<0.05)。表现为随着浓度的增加抑制率逐渐增大(P<0.05),Flavopiridol对人U2骨肉瘤半数抑制率IC5o值为340nmol/L。血浆平均峰值浓度顺铂和Flavopiridol联合应用对人U2骨肉瘤细胞随着时间的增加抑制率逐渐增大,联合用药组与FP和DDP单独用药组相比抑制率差异具有统计学意义(P<0.05)。Flavopiridol浓度为0、100、200、340、400nmol/L作用于人U2骨肉瘤细胞,其凋亡率分别为3.60%、7.13%、19.40%、38.90%、42.49%。表现为随着浓度的增大凋亡率逐渐增大;联合用药:空白对照组、DDP、FP、联合用药组(DDP+FP)其凋亡率分别为2.28%、13.03%、38.90%、56.11%,联合用药组相比两药单独应用组细胞凋亡率均明显提高。联合用药组(FP+DDP)相比DDP组细胞G1期细胞明显增加,S期细胞减少;联合用药组(FP+DDP)相比FP组G1期细胞减少,S期细胞增加。结论:Flavopiridol能抑制人U2骨肉瘤细胞的增殖,并能诱导细胞发生凋亡。Flavopiridol联合顺铂作用人U2骨肉瘤细胞时两种药物具有协同作用。Flavopiridol能增强人U2骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性。
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