玉米须甾醇的提取纯化及抑菌活性

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玉米须是一种传统的中草药材,其含有多种生物活性成分,如皂苷、黄酮类物质、多糖、维生素C、甾醇类物质、氨基酸和维生素E等,具有一定的药理作用和食疗功效。植物甾醇是一种类似环状醇结构的物质,明显的降血脂、抗氧化、消炎、抗癌等作用。为了提高玉米须甾醇的得率和探究玉米须甾醇的抑菌活性,本文对玉米须甾醇的提取、纯化、抑菌效果及抑菌机制进行了研究。1.为了提高玉米须甾醇的得率,应用响应面设计对超声与微波联合提取玉米须甾醇的工艺进行优化,建立了相应的回归模型。在单因素试验的基础上,考查超声时间、超声波功率、液料比和微波时间对玉米须甾醇提取率的影响。通过中心组合试验优化获得玉米须甾醇的提取工艺条件为:超声时间55min,超声波功率200W,料液比1:40(g/mL),微波时间16min。影响因素显著性的大小顺序依次为:料液比、超声时间、微波时间、超声波功率。通过五次验证试验,玉米须甾醇的提取率为0.76%,与理论预测值基本符合。2.对单独超声辅助提取法、单独微波辅助提取法和超声与微波联合辅助提取法的提取效果进行研究,结果表明超声与微波联合辅助提取法较优。3.为了进一步除去杂质,采用大孔树脂吸附法对玉米须甾醇粗提液进行分离纯化研究。通过对大孔树脂S-8、D101、AB-8、D3520和NKA-9的分离纯化效果比较分析得知大孔树脂AB-8的吸附率和解吸率都较高,适合用于玉米须甾醇纯化工艺的研究。通过四因素三水平正交试验设计,确定大孔树脂纯化玉米须甾醇的工艺参数为:树脂种类为AB-8,树脂质量为2.50g(进样体积为30mL);进样浓度为0.20mg/mL;解吸液比例(95%乙醇:三氯甲烷)为1:5(V:V);在该纯化工艺条件下,玉米须甾醇得率为86.32%。4.通过薄层色谱法对玉米须甾醇粗提物纯化前后的样品进行甾醇类物质的定性分析。结果表明,采用石油醚/乙醚混合溶剂作为展开剂效果较好,玉米须甾醇样品中各组分的比移值均在0.40~0.80之间;玉米须提取原样和纯化后样品中均含有甾醇类物质,且纯化后的样品中主要含有β-谷甾醇。采用气相色谱-质谱法鉴定,纯化样品中含有菜油甾醇、豆甾醇和谷甾醇。5.采用滤纸片法考查了玉米须甾醇对常见的细菌与霉菌的抑制效果。研究结果表明,玉米须甾醇对受试细菌与霉菌均有一定的抑制作用,对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、毛霉和青霉的抑制作用较为明显,且对金黄色葡萄球菌的抑制效果最强,最低抑制浓度为1.5mg/mL。6.为了探究玉米须甾醇对菌体的抑制机制,采用测电导率法、考马斯亮蓝法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法分别考查了玉米须甾醇对菌体细胞膜通透性、菌体蛋白质含量和菌体利用还原糖能力的影响。结果表明,玉米须甾醇使受试菌体内电解质出现渗漏,菌体细胞膜的透性发生变化;菌体蛋白质的含量下降,菌体蛋白质合成的速度受到抑制;还原糖的消耗速度变慢,菌体利用还原糖的能力下降。7.在体外条件下,玉米须甾醇对亚硝酸盐具有一定的清除作用,当玉米须甾醇浓度为2.0mg/mL时,对亚硝酸盐的清除率为78%。
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