胎衣不下是奶牛常见的繁殖障碍性疾病之一,严重地影响着奶牛健康和奶牛养殖业的经济效益。酒炙车前子作为治疗奶牛胎衣不下的传统中药验方,具有显著的临床疗效。本实验室通过前期研究,建立了酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下有效物质分离体系,并确定了其有效物质为活性组分为Ⅲ和Ⅵ,但其活性组分的化学成分并未明确。因此,本试验的目的是分析酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下的活性组分的化学成分。试验1:参照本实验室建立的分离体系对活性组分Ⅲ和Ⅵ进行分离,并选用径高比为1∶10的ODS反相柱,以甲醇—水为流动相对其活性组分Ⅲ和Ⅵ进行梯度洗脱纯化,计算分离和纯化后的回收率。试验2:将15头胎衣不下奶牛随机分为阴性对照组(生理盐水)、活性组分Ⅲ组(纯化后的活性组分Ⅲ)和活性组分Ⅵ组(纯化后的活性组分Ⅵ),观察记录给药后48 h内胎衣排出时间及治愈率。试验3:以Hyper gold C18(100 x 2.1 mm 1.9μm)为色谱柱,乙腈(含0.1%甲酸)—水(含0.1%甲酸,5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,采用液质联用技术(LC-MS/MS)的ESI离子源,于正、负离子模式下采集活性组分Ⅲ和Ⅵ的一级和二级质谱数据。试验1的结果显示:活性组分Ⅲ分离后的回收率为28.00%,并于甲醇(70%)—水(30%)的洗脱剂下纯化,纯化后的回收率为88.65%;活性组分Ⅵ分离后的回收率为25.02%,并于甲醇(60%)—水(40%)的洗脱剂下纯化,纯化后的回收率为72.88%。试验2的结果显示:活性组分Ⅲ组平均排出时间为11.90 h±3.92 h,治愈率为60%;而活性组分Ⅵ组平均排出时间为15.67 h±9.27 h,治愈率均为80%;阴性对照组治愈率为0%。试验3的结果显示:根据碎片离子与精确分子质量信息同Metlin、HMDB、MassBank、PubChem数据库比对,活性组分Ⅲ在正、负离子模式下共鉴定38个化合物,主要包括脂质类、黄酮类、胺类、有机杂环类、维生素类、环烯醚萜类、有机酸等化合物;而活性组分Ⅵ在正、负离子模式下鉴定36个化合物,主要包括脂质类、黄酮类、有机杂环类、酚类、萜类等化合物。上述结果表明:通过LC-MS/MS技术分析和鉴定的活性组分Ⅲ中38个化合物和活性组分Ⅵ的36个化合物,均为酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下活性组分Ⅲ和Ⅵ的可能有效成分,这将为研发防治奶牛胎衣不下的中药制剂奠定理论和实践基础。