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目的：胰岛素分泌的精确控制是糖尿病发生发展的关键因素，胰岛β细胞内的囊泡膜谷氨酸转运体2（vesicular glutamate transporter2，VGLUT2）转运谷氨酸是胰岛素向细胞膜转移和释放的限速步骤，是调节胰岛素分泌的重要过程。本实验旨在探讨胰岛素反馈调节β细胞系RIN-5F细胞的VGLUT2基因表达与调控机制，以及VGLUT2对β细胞系RIN-5F细胞线粒体功能的影响。 方法：体外培养大鼠胰岛β细胞系RIN-5F细胞,用胰岛素（0，50，100，200，500，1000 nM）处理RIN-5F细胞，采用Real-time PCR和Western blot的方法观察VGLUT2在基因转录和蛋白翻译水平受胰岛素调控的影响；利用IR-siRNA、IRS1-siRNA和IRS2-siRNA基因干扰技术对参与胰岛素的信号通路中的胰岛素受体（insulin receptor，IR）、胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate1，IRS1）和胰岛素受体底物2（insulin receptor substrate2，IRS2）因子进行干扰，检测RIN-5F细胞受RNA干扰后的VGLUT2在基因转录及蛋白翻译水平受胰岛素调控的影响，以观察IR、IRS1、IRS2三种因子与VGLUT2基因表达之间的关系；利用VGLUT2-siRNA干扰RIN-5F细胞，通过流式细胞技术来检测VGLUT2受基因干扰之后的大鼠胰岛β细胞系RIN-5F细胞线粒体膜电位的变化以及Caspase-3蛋白表达的变化。 结果：①胰岛素处理组在100，200，500nM浓度时对大鼠胰腺β细胞系RIN-5F细胞 VGLUT2基因的mRNA及蛋白表达与空白组比较均明显下降（P＜0.05），且在100nM浓度胰岛素时抑制效果最明显；100nM胰岛素在12，18，24h时间点对大鼠胰腺β细胞系RIN-5F细胞VGLUT2基因的RNA及蛋白表达水平较空白对照组均明显下降（P＜0.05）。②RIN-5F细胞经IR-siRNA、IRS1-siRNA和IRS2-siRNA干扰之后，用100nM胰岛素处理大鼠胰腺β细胞系RIN-5F细胞，与Blank组、Lip2000组与Control-siRNA组比较，各RNA干扰组VGLUT2 mRNA及蛋白表达均明显上调（P＜0.05）。③RIN-5F细胞经VGLUT2-siRNA干扰后，干扰组VGLUT2 mRNA表达与Blank组和Control-siRNA组比较均明显下降（P＜0.05），VGLUT2-siRNA干扰组 RIN-5F细胞的线粒体膜电位下降率较 Control-siRNA组有明显升高（88.3％ vs28.3%，P＜0.01），且VGLUT2-siRNA干扰组细胞凋亡蛋白Caspase3表达较Blank组和Control-siRNA组明显升高（P＜0.05）。 结论：在无糖条件下VGLUT2基因表达受到胰岛素浓度和时间依赖的特异性抑制；胰岛素作用信号通路中的IR、IRS1和IRS2参与了大鼠VGLUT2基因的表达调控，提示胰岛素是通过其胰岛素受体信号通路中的参与因子对VGLUT2基因表达进行负反馈调控的；VGLUT2-siRNA干扰可使RIN-5F细胞线粒体膜电位下降和细胞凋亡蛋白Caspase3表达上调，提示VGLUT2可能参与了胰岛β细胞的凋亡过程。