【摘 要】
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鼠李糖（L-Rhamanose）又名6-脱氧-L-甘露糖,广泛存在于植物的多糖、糖苷、植物果胶和细菌多糖中,是很多细菌,植物,真菌细胞壁的重要组成成分。随着鼠李糖苷类化合物的生物医药活性和药理作用机制的不断阐明,鼠李糖苷类化合物越来越受到重视。而UDP-鼠李糖作为合成鼠李糖苷的直接糖基供体,参与各种鼠李糖苷的形成,在鼠李糖苷的合成中十分重要。UDP-鼠李糖是在糖基转移酶的催化下与类黄酮、萜类等次生
【基金项目】
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内蒙古高校科技创新团队项目（NMGIRT2222）；
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鼠李糖（L-Rhamanose）又名6-脱氧-L-甘露糖,广泛存在于植物的多糖、糖苷、植物果胶和细菌多糖中,是很多细菌,植物,真菌细胞壁的重要组成成分。随着鼠李糖苷类化合物的生物医药活性和药理作用机制的不断阐明,鼠李糖苷类化合物越来越受到重视。而UDP-鼠李糖作为合成鼠李糖苷的直接糖基供体,参与各种鼠李糖苷的形成,在鼠李糖苷的合成中十分重要。UDP-鼠李糖是在糖基转移酶的催化下与类黄酮、萜类等次生代谢产物缀合,产生可溶性鼠李糖苷,发挥其特殊的生物活性与药理特性。然而,商品化的UDP-鼠李糖难以获得,而化学合成又非常繁琐,副产物太多,这极大的限制了植物鼠李糖苷相关的生物学研究。因此,UDP-鼠李糖的生物合成途径备受人们的关注,是近年来黄酮类化合物领域研究的热点。本研究以内蒙古特色药用植物中间锦鸡儿为材料,从其基因组（未公布）数据中通过Blast分析比对,挖掘出4个UDP-鼠李糖合成酶基因,分别命名为Ci RHM-1,Ci RHM-2,Ci RHM-3,Ci NRS/ER。生物信息学分析Ci RHM是一个三功能酶,具有氧化、异构和还原的功能,可以一步直接将UDP-葡糖糖催化合成UDP-鼠李糖。而Ci NRS/ER是一个双功能酶,只能具有异构和还原的功能。后续,将这4个基因PCR扩增,构建原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中进行表达。结果显示Ci RHM-1原核表达为包涵体,Ci RHM-2与Ci NRS/ER可以表达并获得的水溶性蛋白质,SDS-PAGE电泳显示其纯度均在95%以上。而Ci RHM-3无论是利用mbp标签还是His标签均不能在原核表达系统中表达。为了可以更进一步的研究鼠李糖合成酶的催化机理,我们将经镍柱、离子柱和分子筛进一步纯化的Ci RHM-2与Ci NRS/ER酶蛋白利用Hamptons公司的8个结晶试剂盒对其蛋白质晶体进行了初筛。
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