大豆（Glycine max）的起源地是中国,它为人类提供了能够食用的植物油,也是人体内蛋白质的供给体之一。大豆是一种经济价值极高的粮油作物,在我们的日常生活和农业生产中的地位可谓举足轻重。然而遗憾的是,大豆在我国的产量水平并不高,一个重要的影响因素就是地域环境,而地域环境之间的差别很大程度上是光周期的差别,这导致大豆中优质的品种不能适应大范围的种植区域,产量才迟迟不能提高。因此必须对大豆光周期调控机制进行深入探索,为培育高产大豆奠定基础。RAV转录因子负调控植物的生长发育进程。通过对拟南芥、玉米、辣椒等植物的RAV转录因子的研究,发现RAV转录因子能够识别结合CAACA和CACCTG基序。大豆GmRAV基因与拟南芥At RAV基因均是关键的开花抑制因子。本实验室的前期研究中应用DAP-Seq和RNA-Seq等方法对GmRAV基因的转录结合位点和差异表达基因的功能进行了测定和研究,发现GmRAV蛋白可以体外结合CAACA和CACCTG基序并调节GmFT5a和GmMULE基因表达。因此本研究进一步阐明大豆GmRAV是否通过与GmFT5a和GmMULE启动子结合,调节其表达从而抑制开花,阐明大豆GmRAV基因参与大豆开花途径和发育调控的作用机制,为改良大豆生育期提供理论基础和依据。本研究以实验室前期获得的大豆转基因GmRAV-ox-7株系和野生型大豆为实验材料,通过ChIP-qPCR对GmRAV蛋白与GmFT5a和GmMULE启动子的结合情况进行分析;对GmRAV-i-3株系和GmRAV-ox-7株系进行长、短日照处理和取样,通过实时荧光定量PCR分析长、短日照下转基因大豆与野生型大豆中GmFT5a和GmMULE表达量的变化;进一步构建pro GmFT5a::LUC和pro GmMULE::LUC融合表达载体,通过农杆菌转化烟草的瞬时表达实验比较经过不同光照处理后在不同时间点GmFT5a和GmMULE启动子的转录活性,分析GmRAV对GmFT5a和GmMULE表达的影响情况。主要实验结果如下:1.ChIP-qPCR实验分析GmRAV与GmFT5a和GmMULE启动子的结合情况表明,在长、短日照下,GmRAV与包含CAACA基序的GmFT5a（P2）启动子和GmMULE（P1）启动子区域显著结合。在过表达GmRAV基因大豆中,与长日照相比,短日照处理下的GmRAV与GmFT5a启动子的结合明显增强;GmMULE的富集与野生型大豆相比显著增加,表明GmRAV同样能够结合GmMULE启动子。2.利用实时荧光定量PCR分析GmFT5a和GmMULE的表达水平发现,在长、短日照处理条件下,与野生型大豆植株相比,GmFT5a和GmMULE的表达量在植株GmRAV-i-3中均升高,而在植株GmRAV-ox-7中均降低。3.通过使用农杆菌介导烟草的瞬时表达测定法测定GmRAV与CAACA基序的结合以及与体内GmFT5a和GmMULE启动子相互作用的分析发现,GmRAV与GmFT5a和GmMULE启动子的结合受日长的调控。在长、短日照两种条件下,烟草中的LUC活性在有GmRAV蛋白表达的植株中要比对照组无GmRAV蛋白表达的植株中的更低,并且在短日照条件下各个构建体的相对表达活性（LUC/REN）都比长日照条件下的更高。在短日照条件下,通过植物成像系统捕获的空载体p B7WG2（no35S）-35S::GFP和pro GmMULE::LUC/pro GmFT5a::LUC发光信号显著强于pro GmRAV::GmRAV-3F6H-35S::GFP和pro GmMULE::LUC/pro GmFT5a::LUC。GmRAV蛋白通过结合GmFT5a和GmMULE启动子抑制了GmFT5a和GmMULE的表达,从而抑制大豆开花。