基于多元统计分析的急性胃黏膜损伤大鼠背部依文思蓝渗出点分布特征及其效应研究

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:phf
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目的:采用空间自相关及多元统计分析技术研究急性胃黏膜损伤(acute gastric mucosal injury,AGMI)大鼠背部依文思蓝(Evans Blue,EB)渗出点的体表分布特征,以探讨穴位体表几何位置的数学特征与脏腑病变的相关性。方法:通过预实验获取实验研究条件后,实验一选用禁食24h后体重为185-195g的SPF级健康成年Wistar大鼠,将其随机分成正常组、生理盐水组、0.40M、0.45M、0.50M、0.55M、0.60M浓度盐酸组,每组8只,共56只。采用相应浓度盐酸对大鼠灌胃1.5ml制备AGMI模型,生理盐水组灌胃等量生理盐水,正常组仅模拟抓取动作。各组大鼠随机选取2只于造模后13h取材,采用苏木精-伊红染色法观察胃黏膜镜下病理,不纳入后续观察。剩余每组6只于造模后4h麻醉,尾静脉注射EB(0.2ml/100g,20mg/ml溶于生理盐水中),对注射成功的大鼠进行脱毛,分别于造模后5、7、9、11、13h将其固定,并在同一高度下拍照采集大鼠背部平面图像。在图像中采用经纬网格计数法构建坐标系,记录渗出点个数及其网格位置,采用聚类分析、因子分析、相关分析、轮廓分析的多元统计分析技术对数据进行处理。实验二随机将Wistar大鼠(严格选用禁食24h后体重为185-195g大鼠)分成空白组、模型组、电针胃俞组、电针特征区域组,刮痧特征区域组,每组8只,共40只。造模前麻醉各组大鼠并进行脱毛,其中在电针特征区域组、刮痧特征区域组中,将绘制的5mm*5mm经纬网格置于大鼠背部,标出实验一获得的“特征区域”。并根据实验一结果采用0.60M浓度盐酸对大鼠灌胃1.5ml制备AGMI模型,空白组灌等量生理盐水,于造模后13h开始干预。对各组大鼠采用黑袜套头,(1)空白组、模型组仅模拟抓取动作;(2)电针胃俞组:采用自制双极针直刺双侧胃俞穴约10mm,连接电子针疗仪;(3)电针特征区域组:在“特征区域”的每个网格中点处采用3根针灸针并列直刺约10mm,第1、3针连接电针仪。两组电针参数为频率2Hz,连续波,刺激强度为大鼠局部肌肉轻微抖动且无明显挣扎为度,干预时间为30 min。(4)刮痧特征区域组:在“特征区域”处涂抹少量凡士林,使用刮痧板与皮肤成角约45度,刮痧力度均匀,强度以大鼠无明显挣扎为度,频率约为2次/s,共刮痧120次。以上所有操作均由同一研究人员于固定时间进行,一天一次,连续7天。于第7天干预结束后禁食,在第8天同一时间(即禁食24h后)予以20%乌拉坦(0.6ml/100g)腹腔注射,在麻醉状态下随机取2只大鼠胃组织同一部位行苏木精-伊红染色法,剩余6只取胃组织同一部位采用酶联免疫吸附剂测定法分析相关细胞因子表达。结果:1、实验一大鼠胃黏膜组织病理学观察结果:正常组与生理盐水组大鼠胃黏膜上皮完整,无炎性细胞浸润。各胃黏膜损伤组大鼠胃黏膜可见与盐酸浓度呈正比的黏膜层破坏,炎性细胞浸润等。2、聚类分析与相关分析结果:AGMI大鼠背部EB渗出点通过聚类分析获得L12“特征网格”。其在0.40M浓度组具有与时间变化相关的反向渗出趋势,在0.55M浓度组具有与时间变化相关的正向渗出趋势;在造模后5、7、9h具有与浓度变化相关的反向渗出趋势。3、因子分析与相关分析结果:AGMI大鼠在各浓度下背部EB渗出点通过因子分析获得的“特征区域”均具有时间变化的相关渗出趋势,其中“特征区域1、2、11”渗出趋势较强。4、轮廓分析结果:针对“特征区域11”、“特征区域11’”与时间的交互作用分析,平行与重合轮廓分析结果均显示两组差异无统计学意义(P>0.05),提示“特征区域11”、“特征区域11’”轮廓平行且重合,即二者渗出趋势与程度基本一致。5、实验二大鼠胃黏膜组织病理学观察结果:空白组大鼠胃黏膜上皮完整,无炎性细胞浸润。模型组大鼠胃黏膜可见黏膜层上皮结构不完整,黏膜组织结构疏松,炎性细胞浸润,组织间有少量红细胞。电针胃俞组、电针特征区域组、刮痧特征区域组大鼠胃黏膜上皮结构基本恢复正常,腺体排列趋于整齐,结构稍疏松,未见明显炎性细胞浸润与充血。6、酶联免疫吸附试验结果结果:模型组大鼠胃组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量均较空白组显著性升高(P<0.001)。与模型组相比,电针胃俞组、电针特征区域组、刮痧特征区域组均能显著降低AGMI大鼠胃组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达(P<0.01、P<0.001);与电针胃俞组比较,电针特征区域组与刮痧特征区域组能显著降低AGMI大鼠胃组织中IL-6细胞因子的表达(P<0.01,P<0.001)。结论:1、运用空间自相关技术以及多元统计的数学分析手段,能够对急性胃黏膜损伤大鼠背部EB渗出点在不同病情、不同时间序列下的渗出现象进行提取与分析,从而获得“特征网格/区域”的体表位置及其渗出趋势。2、电针胃俞组、电针特征区域组、刮痧特征区域组均能显著降低AGMI大鼠胃组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等相关细胞因子的表达;与电针胃俞组相比,电针特征区域组能显著降低AGMI大鼠胃组织中IL-6的表达。
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