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目的采用孕17d(E17)SD大鼠持续低张性缺氧,建立胎儿宫内缺氧动物模型。通过检测子代大鼠脑内神经源性分化因子1(Neurogenic differentiation factor1,Neuro D1)和胰岛素(Insulin)的即时表达,探讨宫内不同程度缺氧对实验鼠行为学的影响,Neuro D1和Insulin表达量的变化以及二者的相互关系并对神经元再生修复的作用,为治疗胎儿缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)提供基础实验依据。方法1.采用孕17d(E17)SD大鼠持续低张性缺氧,建立胎儿宫内缺氧模型。利用异常行为辨别、冰冻切片HE染色及神经行为学实验(悬吊试验、斜坡试验、高架十字迷宫、旷场试验、Morris水迷宫)观察不同程度缺氧(1h、2h、3h)子代大鼠的变化。2.利用实时荧光定量PCR检测分析不同程度缺氧的各组实验鼠Neuro D1和Insulin的m RNA表达变化;利用蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测分析不同程度缺氧的各组实验鼠Neuro D1和Insulin的蛋白表达变化;利用免疫荧光双标(MAP-2与DAPI,Neu N与DAPI)、三标(Neuro D1、MAP-2与DAPI,Neuro D1、Neu N与DAPI,Neuro D1、Insulin与DAPI)进一步观察Neuro D1与Insulin是否有共定位及两者的荧光强度。结果1.随着宫内不同程度缺氧,四个组的新生鼠在皮肤颜色、体重、尖叫、四肢活动方面无多大差异。各项行为学实验(悬吊试验、斜坡试验、高架十字迷宫、旷场试验、Morris水迷宫)的结果表明,与sham组相比,缺氧组的运动功能没有改变,产生焦虑心理亦不明显;缺氧时间为1h,学习能力下降;然而缺氧2h组子代大鼠的自发活动增加,实验鼠学习能力下降不明显,相对于缺氧1h组有好转;但是缺氧到达3h后,学习记忆能力有所改善,接近于sham组。2.实时荧光定量PCR与western-blot检测:PCR结果显示Insulin在缺氧3h组的相对表达达到最高,其次是1h组,而sham组的Neuro D1相对表达量高于缺氧组;western-blot结果显示Insulin与Neuro D1在缺氧1h组中的蛋白表达量达到最高,且Neuro D1与Insulin的相关指数具有统计学意义。3.免疫荧光标记MAP-2、Neu N、Neuro D1、Insulin,激光共聚焦结果显示:缺氧后的子代大鼠的Neuro D1、Insulin的表达量有上升趋势,子代大鼠的Neuro D1与Insulin的共定位表达在缺氧2h组最为明显,Neu N也出现了相似的趋势,但是缺氧后MAP-2没有上升趋势。结论宫内短暂缺氧不影响子代大鼠的运动系统和焦虑心理,但影响子代大鼠的学习记忆能力。宫内不同程度缺氧有助于刺激子代大鼠脑内Neuro D1与Insulin的基因转录翻译,进行高表达,以此诱导NSCs分化为神经元,参与受损神经组织修复、功能重建及脑保护作用。研究显示Neuro D1与Insulin有着密切的关系,对于Insulin的脑保护作用还需进一步研究。