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同种异体移植炎症因子-1(Allograft inflammatory factor-1,AIF-1)是由147个氨基酸组成的多肽,定位于胞浆,具有钙离子结合能力的炎症支架蛋白,主要由激活的巨噬细胞表达和分泌,是一种多功能的细胞因子,广泛参与到炎症和免疫相关的多种疾病的发生发展过程,包括器官移植、心血管疾病、免疫应答、自身免疫性疾病、生殖、肿瘤等疾病过程。乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤,其复杂的致病机理仍然不很清楚。越来越多的研究表明,在肿瘤发生发展过程中所形成的肿瘤微环境里,肿瘤相关性巨噬细胞及其分泌的各种细胞因子广泛参与到了肿瘤的发生、生长、转移和免疫逃逸等方面。实验室前人在研究炎症因子AIF-1与乳腺肿瘤的相关性时对乳腺癌临床样本分析发现AIF-1在乳腺导管癌中高表达,且与肿瘤的大小成正相关,同时体内和体外实验均证实上调AIF-1的表达,能够促进乳腺肿瘤的生长。但是AIF-1调控乳腺癌增殖的具体分子机制和所涉及的信号通路尚不清楚。ADMA28(a disintegrin and metalloproteinase 28)是一种解链蛋白-金属蛋白酶,具有蛋白水解酶的功能,有两种形式:分泌型(ADAM28s)和膜整合型(ADAM28m)。通过切割多种细胞因子或其复合物(vWF、IGFBP-3、CTGF)激活下游信号通路参与调控体内多种肿瘤的生长、转移。本论文中,首先通过优化rhAIF-1蛋白纯化体系,获得具有生物活性的高纯度重组蛋白rhAIF-1,并以MDA-MB-231和MDA-MB-361这两株乳腺癌细胞系为实验模型,直接在培养基中添加rhAIF-1后,发现rhAIF-1能够促进细胞的增殖且呈现剂量和时间依赖性。将纯化的蛋白rhAIF-1用罗丹明标记后与细胞共孵育一段时间,共聚焦成像技术分析发现这种外源的蛋白能够穿过细胞膜定位在细胞质中,进一步分析发现rhAIF-1在细胞质不均等分布,而且AIF-1虽然能够聚集在细胞核的周围,但并不能进入细胞核,这提示我们可能有其他因子参与到AIF-1调控细胞增殖的过程。为了找到rhAIF-1可能的相互作用蛋白,我们采用蛋白质免疫共沉淀技术,银染色后分析发现在70-100KDa有明显的特异性条带,通过质谱分析比对数据库中的序列后,初步确定ADAM28m为rhAIF-1可能的相互作用蛋白。接着,我们再次通过免疫共沉淀技术结合免疫印迹对rhAIF-1与ADAM28m两者之间的相互作用进行验证,发现rhAIF-1能够免疫沉淀出ADAM28m。进一步研究发现下调ADAM28m的表达,rhAIF-1促进细胞增殖的现象将被抑制。提示AIF-1可通过与ADAM28m相互作用进而激活下游信号通路参与到了乳腺癌的发生发展进程,为临床研究及靶向治疗提供了新的理论依据和应对策略。