论文部分内容阅读
目的:探究核转录因子κB(Nuclear transcription factorκB,NF-κB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎性反应中对GTP环化水解酶1(GTP cyclohydrolase 1,GCH1)及下游炎症因子的影响,从而进一步探讨小胶质细胞炎症在神经病理性疼痛中的作用及其分子作用机制。方法:将生长状态良好的BV2系小鼠小胶质细胞,采用LPS诱导建立神经炎症性疼痛小胶质细胞模型。按不同的干预方法分为五组:正常小胶质细胞组(Control组)、小胶质细胞+LPS(LPS组)、小胶质细胞+NC siRNA+LPS(Control siRNA+LPS组)、小胶质细胞+NF-κB siRNA+LPS(NF-κB siRNA+LPS组)、小胶质细胞+NF-κB siRNA+GCH1 siRNA+LPS(NF-κB siRNA+GCH1 siRNA+LPS组)。运用IF检测各分组内GCH1蛋白表达水平;通过Western Blot技术检测GCH1在蛋白质水平上的表达;RT-PCR和ELISA技术检测促炎因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)和抗炎因子(IL-10)在mRNA水平上的表达。结果:同对照组相较,LPS诱导的小胶质细胞,细胞密度降低,形态上胞体逐渐变小呈分枝样,胞突伸展,似阿米巴虫样。LPS组和Control siRNA+LPS组小鼠BV2细胞的GCH1荧光强度显著高于Control组(P<0.001);相对于LPS组,NF-κB siRNA+LPS组GCH1的荧光强度显著降低(P<0.001)。与Control组相比,LPS组和Control siRNA+LPS组GCH1的mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001),促炎症因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)表达明显增加(P<0.01),抗炎症因子(IL-10)表达显著降低(P<0.001);与LPS组相比,NF-κB siRNA+LPS的GCH1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α表达明显降低(P<0.01),IL-10表达量明显增加(P<0.01);与LPS组相比,NF-κB siRNA+GCH1siRNA+LPS组GCH1 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α表达量明显降低(P<0.01),IL-10表达量显著增加(P<0.001)。与GCH1 siRNA+LPS相比,NF-κB siRNA+GCH1 siRNA+LPS的IL-1β、IL-6和TNF-α表达明显降低(P<0.01),IL-10表达量显著增加(P<0.001)。结论:NP的病理生理机制复杂,越来越多的证据表明,小胶质细胞炎性反应在中枢敏化和NP发展与维持中均扮演着重要的角色。本研究发现,LPS可成功诱导BV2小胶质细胞炎性反应模型,且该模型中GCH1的转录和表达水平均明显增加;通过NF-κB siRNA和GCH1 siRNA转染小胶质细胞,再用LPS诱导小胶质细胞炎性反应,结果发现GCH1的转录和表达均受到抑制,同时小胶质细胞产生的IL-1β、IL-6和TNF-α生成均受到明显抑制,而IL-10生成明显增强,表明NF-κB信号通路能够通过正向调控GCH1参与小胶质细胞的炎性反应,增加促炎因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和降低抗炎因子(IL-10)。该研究表明,NF-κB可通过调节GCH1表达影响下游炎症因子生成,参与小胶质细胞炎性反应介导的NP发生,这将为NP的临床靶向分子治疗提供新的思路。