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微生态制剂是由调理微生态失调,保持微生态平衡,改善健康状态的益生菌及其代谢产物和促进物质加工制成的添加剂。微生态制剂能够在数量或种类上补充肠道内所缺乏的正常微生物,可以调整或维持肠道内微生态平衡,增强免疫功能,促进营养物质的消化吸收等。本研究通过对培养基成分,开菲尔和芽孢杆菌的接种比例,接种量,培养温度和培养时间进行优化,确定了复合益生菌微生态添加剂最佳培养的条件;在最佳培养条件的基础上,对混合培养后发酵产物进行了部分生理活性的研究。(1)以活菌数为评价指标,通过单因素试验对高密度培养基、脱脂乳培养基和大豆分离蛋白培养基的成分进行了优化。高密度培养基:选用乳清粉和葡萄糖作为碳源,二者的最佳比例为乳清粉:葡萄糖=2:1;选用浓缩乳清蛋白和脱脂乳作为氮源,二者的最佳比例为浓缩乳清蛋白:脱脂乳=2:3。最终确定的高密度培养基的成分组成为(/L):乳清粉:54g,葡萄糖:27g,浓缩乳清蛋白粉20g,脱脂乳粉:30g,酵母粉7.63g,硫酸镁0.2g,硫酸锰0.03g,碳酸钙6.20g。脱脂乳培养基:10%(w/v)脱脂乳,3%(w/v)葡萄糖。大豆分离蛋白培养基:10%(w/v)大豆分离蛋白,3%(w/v)低聚果糖。(2)通过单因素试验和正交优化实验,确定了复合益生菌微生态添加剂最佳培养条件,即:开菲尔与芽孢杆菌的接种比例为2:1,接种量为4%,培养温度28℃和培养时间20h。在该培养条件下,产品中的活菌总数含量较高,乳酸菌为6.14×1010,酵母菌为6.80×109,芽孢杆菌为3.78×1010,活菌总数为1.06×1011。(3)对复合益生菌微生态添加剂进行了降解胆固醇的评价,并对体系产生的胞外多糖进行了测定。结果表明:在降解胆固醇的实验中,高密度,脱脂乳和大豆蛋白混合体系的胆固醇去除率分别为61.82%,58.11%和52.21%;三种混合体系均产生胞外多糖,以大豆蛋白混合体系产生的多糖最多,达到691.54mg/L,高密度混合体系和脱脂乳体系产生的多糖分别为514.16mg/L和216.54mg/L。(4)对复合益生菌微生态添加剂的抑菌性能进行了测定,并对体系产生的蛋白酶活力进行了测定。结果表明:在对致病菌的抑制实验中,三种混合体系对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均有着一定的抑制作用;高密度培养基,脱脂乳培养基和大豆分离蛋白培养基的蛋白酶活力分别为205.54u/mL,125.35u/mL和146.24u/mL。(5)研究了复合益生菌微生态添加剂的免疫活性。实验结果表明,复合益生菌微生态添加剂可以提高免疫器官指数,同时能够增强脾淋巴细胞的增殖能力,并对巨噬细胞的吞噬能力具有一定的促进作用,还可以提高NK细胞的细胞毒活性,具有一定的免疫活性。