猪圆环病毒2型(PCV2)是目前全球养猪业具有重要经济意义的重要病毒性病原体之一,现将与其感染相关的疾病统称为猪圆环病毒相关病(PCVAD),其中危害最严重的是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)。PCV2主要侵害机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,从而容易发生其他致病性微生物的继发或混合感染,严重危害猪群健康。自2006年猪圆环病毒2型疫苗问世以来,疫苗的免疫接种成为防治猪圆环病毒病的主要手段。目前四种商品化疫苗已在世界范围内广泛使用,其中两种都是以PCV2 Cap蛋白作为免疫原,实验和现场研究已经清晰地表明PCV2疫苗具有降低病毒血症、消除PCVAD、增加生长性能等方面的功效,但是在免疫接种的猪群中仍然会发生PCVAD,这意味着现有商品化疫苗的免疫接种无法完全阻止PCV2感染或传播;此外,还有全病毒培养获得的病毒滴度低、灭活不彻底导致毒力返强、价格昂贵和保护率差等可能性。因此,开发新的安全有效的疫苗对控制PCV2感染是十分必要的。PCV2 ORF2编码的Cap蛋白是病毒主要的结构蛋白并且具有型特异性表位,一直以来也是PCV2重组疫苗的靶向物,但是针对其他因素对Cap蛋白免疫原性影响的研究却很少。因此,本研究致力于寻找一种能增强Cap蛋白免疫原性的方法以期提高Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效果。为了在原核表达系统表达PCV2截短Cap蛋白与T、B细胞表位的串联重组蛋白,并评价其免疫原性,我们根据之前的报道分别筛选了Rep和Cap蛋白上的T、B细胞表位后送去合成基因,然后将截短cap基因和合成的表位基因依次插入到pET-32a载体,共获得三种重组质粒:pET-B-cap、pET-T-cap和pET-T-B-cap。依次PCR、双酶切和DNA测序鉴定,结果证明成功构建三种重组表达质粒,之后转化E.coli BL21(DE3)感受态,在IPTG诱导下表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析验证,大小分别约为49、46和54 kDa,主要以包涵体形式存在,并具有较好的反应原性。分别用获得的rB-Cap、rT-Cap和rT-B-Cap蛋白制备的疫苗免疫SPF级BALB/c小鼠,间接ELISA抗体检测结果显示以上疫苗都能激发较高水平的Cap蛋白抗体,其中以rT-B-Cap组的抗体水平最高,且显著高于r Cap和商品化全病毒灭活疫苗组,表明同时串联T、B优势抗原表位的Cap蛋白免疫原性得到提高。优势表位串联Cap蛋白较好的抗原性凸显了以Cap蛋白为基础的疫苗在防治PCV2病毒感染方面的显著效果,并且也可能提供了一种用于提高基于表位的疫苗抗原性的方法。